植物总 RNA 的提取 抽提 RNA 所用的研钵酒精灼烧 5-10min.，其他器皿均用 0.1%的 DEPC 水处理，24hr. 后高温高压灭菌两次，以去除 RNA 酶，所有试剂都保证没有 RNA 酶污染。 1) 1.5ml 离心管中加入 1ml Trizol，取 0.1g 组织在液氮中研磨至粉末，加入到 Trizol 中，立即充分混匀。 2) 将混匀的组织在 15-30℃放 10min，使核酸蛋白复合体物完全分离。 3) 4℃，10000rpm 离心 20min，取上清。 4) 加氯仿 200μ l，5M NaCl 200μ l，剧烈振荡 15s，室温放置 3min（或不放置，直接 离心）。 5) 4℃，10000rpm 离心 20min，样品会分成 3 层，取上层水相，取上清。 17 6) 加 500μ l 异丙醇，混匀，室温放置 10min。 7) 4℃，10000rpm 离心 15min，去上清，管底管侧形成胶状沉淀。 8) 加 1ml 75%乙醇，洗涤沉淀，重复两次，洗涤用 4℃，7500rpm 离心 5min，弃上 清。 9) 吹干约 15min。 10) 加 50μ l DEPC 处理的水，65℃溶解，-20℃（最好-80℃）保存。 DNase I 处理消化植物总 RNA 中的基因组 DNA 1) 取 5μ l 的植物总 RNA，然后顺序加入 1μ l 10×缓冲液，1μ l DNase，3μ l RNase-free 水，总体积 10μ l，充分混匀后，37℃温育 30 min。 2) 加入 1μ l 终止缓冲液，65℃温育 10min，使 DNase 失活。 反转录 cDNA 1) 在上述总体积为11μ l 反应液中加入1μ l Oligo(dT)18 引物4μ l 5×缓冲液，2 μ l dNTP， 1μ l 反转录酶，1μ l RNase 抑制剂，总体积 20μ l，充分混匀后，42℃温育 1-1.5hr。 2) 70℃温育 10min，终止反应 trizol 法提取 RNA 步骤 2010 年 03 月 09 日 星期二 17:07 从组织中提取总 RNA 1)液氮研磨，组织块直接放入研体中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮， 再研磨，如此三次，按 50-100mg 组织/mlTrizol 加入 Trizol，转移入离心管进行第 2 步操作。 2) 匀浆：组织样品按 50-100mg/mlTrizol 加入 Trizol，另外，组织体积不能超过 Trizol 体积 的 10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需 1-2 分钟。 从细胞中提取总 RNA 1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用 Trizol 进行消化、裂解，Trizol 体积按 10cm2/ml 比例加入。 2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每 1ml Trizol 可裂解 5×106 动物、植物或...
