第36讲PCR一轮复习VIP免费

生物技术实践选修1第36讲DNA的粗提取与鉴定及PCR技术返回导航选修1生物技术实践第1轮·生物课标要求1.DNA的粗提取与鉴定。2.说明PCR技术的原理、方法步骤及应用。返回导航选修1生物技术实践第1轮·生物1.实验原理(1)DNA的溶解性①DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同溶解析出增大溶解考点一DNA的粗提取与鉴定返回导航选修1生物技术实践第1轮·生物②DNA不溶于,但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精,利用这一原理可将DNA与蛋白质进一步分离。(2)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性(3)DNA的鉴定DNA与二苯胺（现配现用）沸水浴加热,呈______色。酒精溶液蓝①①蛋白酶蛋白酶————水解蛋白质，水解蛋白质，对对DNADNA没有影响没有影响②②高温高温————大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受6060～～80℃80℃而而DNADNA在在80℃80℃以上才会变性以上才会变性③③洗涤剂洗涤剂————瓦解细胞膜，瓦解细胞膜，但对但对DNADNA没有影没有影响响返回导航选修1生物技术实践第1轮·生物2.操作流程材料的选取—选用含量相对较高的生物组织↓破碎细胞(以鸡血为例)—鸡血细胞→加→用玻璃棒搅拌→用纱布过滤→收集滤液去除杂质—利用DNA在中溶解度不同,通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质↓↓DNA蒸馏水不同浓度NaCl溶液DNA的析出酒精↓将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的溶液—在溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂,混合均匀后将试管在沸水中加热5min,溶液变成.DNA的鉴定—蓝色返回导航选修1生物技术实践第1轮·生物注意注意1.1.破碎细胞，获取含破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液动物细胞：动物细胞：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液，水分可以大量进入血细胞内，蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，从而释放出使血细胞胀裂，从而释放出DNADNA。。①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？②搅拌的目的是什么？（注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能过快过猛，防止打碎DNA）加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA植物细胞：需要先用一定的洗涤剂溶解细胞膜实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液①①加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？①返回导航选修1生物技术实践第1轮·生物答：答：洗涤剂是一些离子去污剂，洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于能溶解细胞膜，有利于DNADNA的释放的释放；；食盐食盐的主要成分是的主要成分是NaClNaCl，有利于，有利于DNADNA的溶解的溶解②如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？研磨不充分会使细胞核内的研磨不充分会使细胞核内的DNADNA释放不完全，提取的释放不完全，提取的DNADNA量变少，影响量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物实验结果，导致看不到丝状沉淀物、、用二苯胺鉴定不显示蓝色用二苯胺鉴定不显示蓝色等等（1）这个步骤过滤获得什么？获得含核物质的滤液（获取含DNA的滤液）（注意：此时释放出来的大量DNA和RNA往往与蛋白质结合在一起，应用3——4层纱布进行过滤，除去一些颗粒较大的杂质）（（22）滤液中可能含有哪些细胞成分杂质？）滤液中可能含有哪些细胞成分杂质？可能含有核蛋白、多糖和可能含有核蛋白、多糖和RNARNA等杂质（等杂质（为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNA需要将滤液需要将滤液作进一步处理作进一步处理））返回导航选修1生物技术实践第1轮·生物2.2.除去滤液中的杂质除去滤液中的杂质方案一、在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再加入蒸馏水，调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤除去溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。思考：（1）加入2mol/L的NaCl溶液，搅拌1min，注意应沿一个方向，目的是？目的是使DNA充分溶解（2）过滤溶解有DNA的2mol/L的NaCl溶液，获得什么？含DNA的滤液（3）这一步过滤的目的是？获得含DNA的滤液，除去不溶的杂质（4）加蒸馏水的目的是？调节NaCl溶液物质的量为接近0...