11药品微生物限度检查药品微生物限度检查————控制菌检查控制菌检查20052005年年44月月1616日星期六日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室中国药品生物制品鉴定所抗生素室22菌种分离鉴定流程菌种分离鉴定流程增菌增菌分纯分纯初步鉴别试验初步鉴别试验革兰染色革兰染色生化试验生化试验酶类试验酶类试验抗生素敏感性试验（用于菌抗生素敏感性试验（用于菌种鉴定）种鉴定）全面鉴定全面鉴定血清分型血清分型毒素分析毒素分析基因分型基因分型蛋白组分析蛋白组分析自动化仪器分析（生化，酶自动化仪器分析（生化，酶学，基因序列等）学，基因序列等）20052005年年44月月1616日星期六日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室中国药品生物制品鉴定所抗生素室3322供试品的制备供试品的制备参看药典微生物限度检查法参看药典微生物限度检查法有抑菌活性的检品应进行预处理有抑菌活性的检品应进行预处理稀释法稀释法离心沉淀集菌法离心沉淀集菌法3000r/min3000r/min离心离心30min30min，，有有不溶性沉渣先不溶性沉渣先500r/min500r/min离心离心5min5min薄膜过滤法薄膜过滤法0.45um0.45um±±0.02100ml0.02100ml中和法磺胺类中和法磺胺类100ml100ml中中1~5ml1%1~5ml1%对氨基苯甲酸；砷汞，硫乙醇酸对氨基苯甲酸；砷汞，硫乙醇酸盐；洗必泰，聚山梨醇酯盐；洗必泰，聚山梨醇酯8080自然沉降法难溶于水的抗菌制剂自然沉降法难溶于水的抗菌制剂同时做阳性和阴性对照同时做阳性和阴性对照了解常用的培养方法和常用培养基上各控制菌菌落了解常用的培养方法和常用培养基上各控制菌菌落特征，知道如何进行菌种分纯，以便于进行下面的特征，知道如何进行菌种分纯，以便于进行下面的试验试验20052005年年44月月1616日星期六日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室中国药品生物制品鉴定所抗生素室4433革兰染色、镜检革兰染色、镜检3.13.1操作步骤操作步骤3.1.13.1.1制片制片--过火固定，避免水冲，破坏过火固定，避免水冲，破坏细胞结构使染料易透过细胞结构使染料易透过3.1.23.1.2结晶紫染色结晶紫染色-1-1分分3.1.33.1.3碘液媒染碘液媒染-1-1分分3.1.43.1.4乙醇脱色乙醇脱色-30-30秒秒3.1.53.1.5沙黄复染沙黄复染-30-30秒秒20052005年年44月月1616日星期六日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室中国药品生物制品鉴定所抗生素室553.23.2染色结果染色结果革兰阳性菌呈蓝紫色；革兰阴性菌呈红色革兰阳性菌呈蓝紫色；革兰阴性菌呈红色。可以分别用金黄色葡萄球菌和大肠埃希。可以分别用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌作质控株菌作质控株20052005年年44月月1616日星期六日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室中国药品生物制品鉴定所抗生素室663.33.3革兰染色注意事项革兰染色注意事项3.2.13.2.1玻片必须洁净玻片必须洁净3.2.23.2.2涂片菌量宜少，菌不可浓涂片菌量宜少，菌不可浓3.2.33.2.3新鲜培养物新鲜培养物3.2.43.2.4脱色是关键脱色是关键20052005年年44月月1616日星期六日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室中国药品生物制品鉴定所抗生素室773.33.3革兰染色意义革兰染色意义3.3.13.3.1初步识别细菌，利于进一步鉴定初步识别细菌，利于进一步鉴定3.3.23.3.2初步选择治疗用药物初步选择治疗用药物3.3.33.3.3与致病性相关，阳性以外毒素为主与致病性相关，阳性以外毒素为主，阴性菌以内毒素为主，阴性菌以内毒素为主20052005年年44月月1616日星期六日星期六中国药品生物制品鉴定所抗生素室中国药品生物制品鉴定所抗生素室8844触酶试验触酶试验触酶试验不应当在含血的碟子上（用上面触酶试验不应当在含血的碟子上（用上面的菌落试验应小心）进行因为红细胞中含的菌落试验应小心）进行因为红细胞中含有触酶可能导致假阳性出现有触酶可能导致假阳性出现用于检测细菌是否生成过氧化氢酶，是否用于检测细菌是否生成过氧化氢酶，是否利于在有氧环境中生长利于在有氧环境中生长细菌在有环境中代谢可以生成超氧离子和过氧化氢，细菌在有环境中代谢可以生成超氧离子和过氧化氢，具有杀菌作用，能生成触酶的菌...
