细胞培养注意事项VIP专享VIP免费

动物种质资源体细胞采集、培养、保存规程(讨论稿) 本规程适用于动物种质资源体细胞采集、培养、保存及其相关操作。由于细胞培养技术内容非常丰富，本规程仅对其中最主要的部分做了基本的规范。在实际操作过程中，在此规程的基础上，一些实验技术的细节，还需参照相关的权威性的参考书，并根据本实验室的具体情况加以灵活运用。 培养室内的无菌操作 细胞培养实验所需的物品、器材应进行严格的灭菌或购买无菌的一次性物品。玻璃瓶可拧松瓶盖灭菌（指高压蒸汽灭菌，以下同）或用铝箔纸包住瓶口，和瓶盖分别灭菌。其它玻璃和金属器材用铝箔纸包裹进行灭菌。玻璃吸管应塞上棉花球灭菌，然后置于烘箱中烘干。不适于进行高压灭菌的瓶塞等其它物品，可浸泡在 70%酒精中进行灭菌，然后在超净工作台上吹干。细胞培养液和其它不适于高压灭菌的溶液，应通过过滤（采用0.22μ m 的孔径的滤膜）灭菌。无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖地面一次，并用紫外线照射灭菌 30分钟。超净工作台每次使用前用70%酒精擦拭，然后紫外线照射 30 分钟。 进入无菌操作室要求穿着无菌工作服、工作帽、口罩。开始工作前用70%酒精对手、前臂及乳胶手套进行消毒。细胞培养等操作应在超净工作台或有空气过滤器的空间内进行。操作前点燃酒精灯，细胞培养的所有操作，如打开或关上试管或培养瓶盖等，都要靠近酒精灯并经过短时间的灼烧。烧过的实验器械，冷却后才能使用。已吸过培养液或其它有机液体的吸管不得再用火焰烧灼。不同液体分别用不同的吸管吸取，不能混用。开盖后的培养瓶尽量避免垂直放置，同时瓶盖应扣放在超净工作台上，以减少落入细菌的机会。细胞培养物在处理和使用前，不要过早暴露于空气中。在进行转移液体操作时，移液器不能触及瓶口以避免细菌污染或交叉污染。放置吸管时管口向下倾斜，以防止液体倒流引起污染。培养细胞的废弃用品，应放入可封装的容器内。 细胞培养样品的采集 器 材 与 试 剂 ： 1.眼 科 剪 ， 弯 镊 子 、 手 术 刀 ； 2.装 有 无 血 清 培 养 液 或PBS（KCl,2.7mM;KH2PO4,1.5mM;NaCl 136.9mM;Na2HPO4, 8.1mM）的小瓶； 3.10ml、50ml小烧杯；4. 培养皿。 操作步骤： 1. 采样时应严格无菌操作。采样时应用已灭菌的器械、无菌包装的器皿和经过滤灭菌的缓冲溶液和培养液。采样过程中尽量避免紫外线照射和接触对细胞有毒害作用的化学试剂。在有污染因素存在的区域采样时，应将样品在含有 500-1000...