1 选修 1《生物技术实践》 第一部分 微生物的利用 实验 1 大肠杆菌的培养和分离 一、大肠杆菌 1．大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌，为兼性厌氧的肠道杆菌。 2．用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。 二、本实验的内容是将大肠杆菌扩大培养和划线分离。分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。 本实验用 LB 液体培养基（通用的细菌培养基）扩大培养大肠杆菌，培养后用 LB 固体平面培养基进行划线分离。 三、 细菌的培养和分离 1．细菌的培养： （1）繁殖方式：细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约 20min分裂一次。 （2）培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环来转移带菌的培养物。 2．细菌的分离 分离的方法与特点： 划线分离法：操作简单。（接种环） 涂布分离法：操作复杂，单菌落更易分开。（玻璃刮刀） 四、灭菌操作 1．灭菌操作的原因：获得纯净的培养物的关键是防止外来杂菌的入侵污染。 2．无菌操作的条件： （1）各种器皿必须是无菌的。（首要条件） （2）各种培养基必须是无菌的。 “细菌喜荤，霉菌喜素” 细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压。在中性偏碱的环境中生长（制备培养基时需调节培养基的酸碱度）。 霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。在中性偏酸的环境中生长（制备培养基时需调节培养基的酸碱度）。 2 如果培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2 压力（90 ℃以上）灭菌 30min. 3．灭菌的方法：是指杀灭病原微生物的方法。 （1）灼烧灭菌 （2）干热灭菌：160-170 ℃下加热 1-2h。 （3）高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃(1kg/cm2)下维持 15min. （4）过滤灭菌：G6 玻璃砂漏斗过滤（用于有些不能加热灭菌的化合物，如尿素加热会分解） 4．消毒的方法：是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法 （1）煮沸消毒法：100℃煮沸 5-6min （2）巴氏消毒法：70-75 ℃下煮 30min或 80 ℃ 下煮 15min （3）化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 （4）紫外线消毒 五、大肠杆菌的培养和分离实验 1．实验步骤： （1）培养基灭菌：将 50mlLB 液体培养基、50mlLB 固体培养基加上封口膜和培养皿用牛皮纸包好进行高压蒸汽灭菌。（封口膜的...
