1 选修 1《生物技术实践》 第一部分 微生物的利用 实验 1 大肠杆菌的培养和分离 一、大肠杆菌 1．大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌，为兼性厌氧的肠道杆菌
2．用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具
二、本实验的内容是将大肠杆菌扩大培养和划线分离
分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一
本实验用 LB 液体培养基（通用的细菌培养基）扩大培养大肠杆菌，培养后用 LB 固体平面培养基进行划线分离
三、 细菌的培养和分离 1．细菌的培养： （1）繁殖方式：细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约 20min分裂一次
（2）培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环来转移带菌的培养物
2．细菌的分离 分离的方法与特点： 划线分离法：操作简单
（接种环） 涂布分离法：操作复杂，单菌落更易分开
（玻璃刮刀） 四、灭菌操作 1．灭菌操作的原因：获得纯净的培养物的关键是防止外来杂菌的入侵污染
2．无菌操作的条件： （1）各种器皿必须是无菌的
（首要条件） （2）各种培养基必须是无菌的
“细菌喜荤，霉菌喜素” 细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压
在中性偏碱的环境中生长（制备培养基时需调节培养基的酸碱度）
霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可
在中性偏酸的环境中生长（制备培养基时需调节培养基的酸碱度）
2 如果培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2 压力（90 ℃以上）灭菌 30min
3．灭菌的方法：是指杀灭病原微生物的方法
（1）灼烧灭菌 （2）干热灭菌：160-170 ℃下加热 1-2h
（3）高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃(1kg/cm2)下维持 15min
（4）过滤灭菌：G6 玻璃砂
