第五章核酸分析( Nucleic aicds)第一节 基础知识一.核酸的基本概念核酸――生物大分子――线性多聚核苷酸 P444 核酸多聚核苷酸 polynucleotide 戊糖 + 碱基磷酸核糖 Ribose 腺嘌呤 Adenine-A 脱氧核糖鸟嘌呤 Guanine-Gdexoyribose胞嘧啶 Cytosine-C胸腺嘧啶 Thymine-T 尿嘧啶 Uracil-U DNA 脱氧核糖核酸dexoyribonucleic acid RNA 核糖核酸 ribonucleic acid 核酸存在于细胞中,DNA——细胞核 RNA——细胞质病毒目前最大分子,电镜下可见,二. DNA结构天然 DNA右手双螺旋链状结构,碱基( A,T,C,G )互补结合(氢键) (base complementary ),遗传信息载体,极重要生物学意义,DNA 复制,转录。反转录结构: P446 糖和磷酸脂化反应——形成链的框架糖-碱基缩合反应——糖苷键三. RNA结构1. 结构:线形多聚合苷酸,与DNA结构不同点① 戊糖-核糖② AGCU-用 V 尿嘧呤代替胸腺嘧呤③ 单链线形分子,局部双螺旋,自身回折2. 种类:三种核糖体 RNA(ribosomal RNA rRNA )转运 RNA(transfer RNA tRNA)在蛋白质合成过程中具有转运 AAs的作用信使 RNA (messager RNA mRNA) 以 DNA为模板又是蛋白质合成模板遗传信息 DNA —转录— mRNA—翻译,转译—蛋白质模板 transcription translation 复制直接模板replication ——每种 mRNA 携带从 DNA 转录的一种或几种蛋白质编码遗传信息—— tRNA携带 AAs,可确认 mRNA 编码DNA结构1953.4.25 Nature 900词 文章Watson 沃森 (25) 生物学家Crick 克里克 (35) 物理学家1951 秋 Watson 美国博士后,丹麦哥本哈根,那不勒斯开会,威尔金斯DNA报告英国剑桥大学卡文迪许实验室威尔金斯,富兰克林,x 线衍射,螺旋结构鲍林,化学家蛋白质α- 螺旋沃- 克:数据;方法——积木提示——氢键遗传信息——的提示——碱基互补第二节核酸提取、分离、纯化提取对象:细胞,组织中——染色体,DNA RNA 细菌,质粒 DNA 提取过程:① 细胞组织破膜、释放、内容物② 分离提取液,除DNA,RNA以外的组分③ DNA,RNA浓缩一.细胞中DNA提取① 细胞组织在裂解液中(Triton X-100和 SDS缓冲液)匀浆溶膜破解——提取液② 利用蛋白水解酶和核糖核酸酶温育,除去蛋白质和RNA ③ DNA提取,进入乙醇见书 P449 (1) 在 6 Vols 裂解液中匀浆(2) 除细胞碎片和离心方法(3) 温育,与蛋白酶K 温育(4) CHCL3 3 ...