犬猫血清中狂犬病抗体的测定酶联免疫吸附法

DB43/T 1076 — 20151 犬猫血清中狂犬病抗体的测定酶联免疫吸附法1 范围本标准规定了犬猫血清中狂犬病免疫抗体的测定方法。本标准适用于接种狂犬病疫苗的犬猫血清中狂犬病免疫抗体的定性检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理向包被有狂犬病病毒抗原的酶标板中加入犬猫血清，犬猫血清中的狂犬病抗体与酶标板中的抗原相结合， 然后加入酶标记物，酶标记物与酶标板上的抗原抗体结合物形成复合物，最后加入底物，底物与酶标记物反应形成有颜色的化合物，终止反应后， 用酶标仪测量其OD值，通过阳性质控的OD值确定犬猫血清中有无狂犬病免疫抗体。4 仪器与设备4.1 酶标仪：内置450 nm 和 630 nm 滤光片。4.2 多道移液器： （50～300）μ L。4.3单道移液器： （5～ 50）μ L，（10～ 200）μ L，（100～1000）μ L。4.4恒温培养箱。4.5振荡混匀器。5 试剂与材料犬猫狂犬病免疫抗体ELISA 检测试剂盒： 试剂盒的组成、 说明及使用注意事项参见附录 A。实验用水应符合 GB/T 6682 的规定。6 操作程序6.1 质控分布与稀释用单道移液器向A1，A2，B1，B2 酶标板微孔里各加90μ L 样品稀释液，分别向A1，A2 孔里加10μ L 阴性质控，向B1，B2孔里加 10μ L 阳性质控，使质控的稀释比例为1：10。DB43/T 1076 — 2015 2 6.2 样品的预稀释向每个血清稀释板微孔里各加入90μ L 样品稀释液， 然后分别加入10μ L 待检血清， 使样品预稀释液的稀释比例为1：10。6.3 样品的分布与稀释向剩余每个酶标板微孔里加入90 μ L 样品稀释液， 然后分别加入10 μ L 样品预稀释液， 用振荡混匀器充分混匀后，用封口膜封好，使样品最终稀释比例为1：100。6.4 孵育（37±1）℃ 孵育（ 60±5）min。6.5 洗液的配制按 1：10 的比例，用实验用水稀释浓缩洗涤液。6.6 洗板取掉封口膜，先甩去酶标板微孔里的液体，然后用多道移液器向每个酶标板微孔里加入300μ L 洗液，每次浸泡30s，再弃去洗液，先后洗涤5 次，最后在吸水纸上拍干。6.7 加酶标记物按 1：10 的比例，用酶标记物稀释液稀释酶标记物后，向每个酶标板微孔里加入100μ L 稀释好的酶标记物，用振荡混匀器充分混匀后，用封口膜封好。6.8 孵...