下载后可任意编辑医院人感染 H7N9 禽流感病毒核酸检测标准操作程序 一、 目的确保人感染 H7N9 禽流感病毒核酸检测过程标准化、 法律规范化, 降低人为不法律规范操作对检测结果造成的影响, 保证结果的准确性和可重复性。二、 适用范围医疗机构临床基因扩增检验实验室根据《关于医院开展人感染 H7N9 禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》( 卫办医政函〔 〕383 号) 和《关于做好医疗机构人感染 H7N9 禽流感检测试剂供给保障工作的通知》( 卫制造电〔 〕29 号) 有关要求, 使用国家疾病预防控制中心制备或商品化试剂盒开展人感染 H7N9 禽流感病毒核酸检测工作。三、 样本采集、 运送和保存尽量采集病例发病早期的呼吸道样本(上呼吸道样本包括咽拭子、 鼻拭子、 鼻咽抽取物、 咽漱液和鼻洗液, 下呼吸道样本包括痰液、 气管吸取物、 肺洗液、 肺组织等)。可将鼻、 咽拭子收集于同一采样管中, 以便提高检出率。患者有下呼吸道样本时, 应优先采集。 根据试剂说明书对样本采集方法有关要求, 制订样本采集标准操作程序( SOP) , 并组织样本采集人员进行培训及考核。样本的采集应当严格根据 SOP 进行。样本采集后, 根据《人间传染病的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒的相关规定进行包装, 用密封容器立即送往实验室。若气温高时, 需放入冰块降温。样本抵达实验室后, 应尽快进行检测, 24 小时内能检测的样本可置于 2～8℃临时保存, 24 小下载后可任意编辑时内无法检测的样本则应置于≤-70℃状态保存。如无-70℃保存条件时, 可于-20℃冰箱暂存。样本避开重复冻融。样本采集、 处理、 运输及保存不当时, 可因病毒 RNA 降解出现假阴性结果, 也可因为样本”污染”出现假阳性结果。四、 PCR 检测( 一) 样本处理样本的核酸提取应当在样本处理区进行。按所采纳的商品化试剂盒说明书要求, 取适量待检样本、 阳性及阴性对比进行核酸提取。样本应尽可能新奇, 提取过程应严防 RNA 酶污染及操作不当导致的 RNA 降解。提取过程如涉及离心步骤, 应采纳低温冷冻离心机; 在生物安全柜内进行加样、 提取过程中, 为防止 RNA 降解, 可将试管架置于托盘内平铺的碎冰上。提取好的 RNA 应及时用于检测, 否则应当-70℃保存。如无-70℃保存条件, 可于-20℃冰箱暂存。( 二) 试剂准备试剂准备应当在试剂准备区进行。根据所用的试剂盒, 样本可进行甲型流感病毒核酸、 禽流感 H7 亚型或 H7N9 ...
