细胞培养过程中的注意事项及试剂配制

细胞培养过程中的注意事项及试剂配制细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一 .常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH 计（测量培养用液PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80 ℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2 孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4 ℃冰箱（放置 serum和培养用液）。二.无菌操作无菌室的灭菌：1. 定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5 ％过氧乙酸擦拭。2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75 ％酒精擦拭或者 0.5 ％过氧乙酸，再用紫外灯照射3. 实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4. 实验后灭菌： 用 75 ％酒精（3‰新洁尔灭） 擦拭超净台、 边台、倒置显微镜的载物台。实验人员的无菌准备：1. 肥皂洗手。2. 穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3. 用 75 ％酒精棉球擦净双手。无菌操作的演示：1. 凡是带入超净工作台内的酒精、PBS 、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75 ％酒精擦拭瓶子的外表面2. 靠近酒精灯火焰操作。3. 器皿使用前必须过火灭菌4. 继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。6. 吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：(1) 新的玻璃器皿的洗消：1. 自来水刷洗，除去灰尘。2. 烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中 12 小时以除去脏物、铅、砷等物。3. 刷洗、烘干： 12 小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。4. 泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾 120g：浓硫酸 200ml：蒸馏水 1000ml）浸泡 12 小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15 次，最后蒸馏水冲洗 3-5次和用双蒸水过 3 次。5. 烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。6. 高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内...