血红蛋白的提取与分离（第一课时）学习目标1、理解凝胶色谱法、电泳法的基本原理，了解缓冲液的组成及其作用；2、掌握血红蛋白的提取与分离的基本过程和方法。学习重点凝胶色谱法的原理和方法。学习难点：1、样品的预处理；2、色谱柱填料的处理和色谱柱的装填小组合作、自主探究【思考】蛋白质的分离和提取的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。【基础知识】㈠凝胶色谱法（分配色谱法）：1、概念：根据被分离蛋白质的，利用具有网状结构的凝胶的分子筛选作用，来分离蛋白质的有效方法。2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度，而的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速，相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。3、具体过程：A. 的蛋白质由于作用进入凝胶颗粒内部而被滞留；的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。B. （1）混合物上柱；（2）洗脱开始，的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内；的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；凝胶颗粒相对分子质量较小的蛋白质相对分子质量较大的蛋白质（1）（ 2）（ 3）（4）（5）B A 多孔板（3）的蛋白质被滞留；的蛋白质被向下移动。（4）不同的蛋白质分子完全分开；（5）的蛋白质行程较短， 已从中洗脱出来，的蛋白质还在行进中。㈡缓冲溶液：1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。2、作用：能够抵制的对溶液的的影响，维持 PH基本不变。3、缓冲溶液的配制通常由种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的就可以制得使用的缓冲液。思考：说出人体血液中缓冲对？思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）㈢电泳：1、概念：指发生迁移的过程。2、原理： 许多重要的生物大分子，如等都具有在下，这些基团会带上。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其移动。电泳利用了待分离样品中各种分子以及分子本身、的不同使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。3、分类：电泳电泳。测定（蛋白质相对分子质量）通常用十二烷基硫酸钠...
