试验DNA的粗提取与鉴定

【实验】 DNA 的粗提取与鉴定一、实验原理1.DNA在 NaCl 溶液中的溶解度随NaCl 浓度的不同而不同。当 NaCl 的浓度为 0．14mol/L 时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可使溶解在NaCl 溶液中的 DNA析出。2.DNA 不溶于酒精溶液，但是细胞中的其他许多物质溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取含杂质较少的 DNA。3.DNA 遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色；DNA还有遇甲基绿溶液被染成蓝绿色的特性。上述两种方法均可用于鉴定 DNA的存在。二、材料用具鸡血细胞液；铁架台，铁环，镊子，三脚架，酒精灯，石棉网，载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量筒（100mL，1 个），烧杯（ 100mL，1 个，50mL、500mL各 2 个），试管（ 20mL，2 个），漏斗，试管夹，纱布；体积分数为 95%的酒精溶液（实验前置于冰箱内24h），蒸馏水，质量浓度为0.1g/mL 的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/L 和 0.015mol/L的氯化钠溶液，二苯胺试剂三、方法步骤步骤操作方法原理制备鸡血细胞液↓取0.1g/mL的 柠 檬酸 钠 溶液100mL，与 新 鲜的 鸡 血混 合 并防止血液凝固，使血细胞与血浆分离搅拌，然后 静 置一 天 或离 心 机离 心 约2～3min，除去 上 清液提取细胞核物质↓取 20mL蒸 馏 水与约5～10mL的 鸡 血细 胞 液混 合 并充 分 搅拌，然后用 单 层纱 布 过滤，取滤液 于 烧杯中使细胞过度吸水而破裂溶解DNA ↓取2mol/L的 NaCl溶液40mL 与上 述 滤液 混 合后，用玻璃 棒 沿一 个 方向 搅 拌1min DNA在高浓度氯化钠溶液中溶解度最大析出DNA并滤取↓沿 烧 杯内 壁 慢慢 加 入蒸 馏 水并 轻 轻搅拌，至白 色 丝状 粘 稠物 不 再增 加 时停 止 加水，然后DNA的溶解度随氯化钠溶液浓度的降低而降低用 多 层纱 布 过滤，取纱布 上 的粘稠物DNA的再溶解↓用 镊 子夹 取 纱布 上 的粘 稠 物放入20mL 浓度为2mol/L氯 化 钠溶液中，搅 拌 至完 全 溶解，然后用 两 层纱 布 过滤，取其滤 液 放入 小 烧杯中DNA在高浓度氯化钠溶液中溶解度最大提取较纯净的DNA ↓取95%的、冷却的 酒 精50mL 与滤 液 混合搅拌，待 出 现丝 状 物时 用 玻璃 棒 将其卷起DNA不溶于酒精，出现沉淀DNA的鉴定取 两 支20 mL的试管，各加 入 物质 的 量浓 度 为2mol／L的 NaCl溶液5mL，将丝 状 物溶解。然后 放 入DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色...