常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇 八年九月修订国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心常用液体配制SOP 2 目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、 DNA 操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、 EIA 系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心常用液体配制SOP 3 一、细菌培养系统1、LB培养基 : 每 1000mL 加分析纯 NaCl 10g ，蛋白胨 10g，酵母粉 5g，用 ddH2O配制，再用 10M NaOH 调 pH 至 7.4(1000mL 一般加 450ul)，高压蒸汽灭菌 15min 冷却后使用。2、固体培养基 : LB 培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min 后使用。3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（ Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g 溶于 500ml 无菌去离子水中，溶解后分装入 4ml 灭菌的 EP 管，全程超净工作台内操作， 避免染菌，分装后－ 20 度保存，培养细菌时做1000×使用。注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用 0.22滤膜过滤除菌后再分装。4、2.5%(g/V) 硫酸卡那霉素（ Kan）注射用硫酸卡那霉素 （液体）通常是 2ml/支，内含 0.5g 卡那霉素。取 25 支药剂（ 50ml），加入 450ml 无菌去离子水中，分装入4ml 灭菌的 EP 管，全程超净工作台内操作， 避免染菌，分装后－ 20 度保存，培养细菌时做 1000×使用。注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用 0.22滤膜过滤除菌后再分装。5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml 培养基（ 卡那霉素抗性国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心常用液体配制SOP 4 培养采用标记试管 ），无菌牙签挑取单克隆至试管中， 于 37℃，220rpm培养。 剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。6、化学感受态制备：1）原理 :：细菌处于容易吸收外源DNA 的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（ Competent cell）。将细菌置于0℃，低渗 CaCl2 溶液中时，菌细胞壁和膜的通透性增强，菌体膨胀成球型。外源DNA 与Ca2+形成抗 DNase的羟基 -钙磷酸复合物黏附于细胞表面， 在经 42℃短暂的热冲击处理（一般热休克90s）后能促进细胞吸收外源DNA复合物。2）仪器、材料与试剂：① 超净...
