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试验报告-果蝇基因组DNA的提取

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四川大学实验报告题目: 果蝇基因组 DNA的提取果蝇基因组 DNA的提取姓名:学号:一、实验目的1. 掌握动物基因组 DNA抽提的操作过程,了解基因组DNA提取的意义 ; 2. 熟悉 DNA提取的步骤和 DNA电泳原理。二、实验原理1. DNA 是绝大多数生物(除少数RNA病毒外)记录、存储、传递遗传信息的载体; 2. DNA 的提取是进行 PCR扩增、 Southern 杂交、限制性片段长度多态性分析等实验的基础。细胞破碎抽提去蛋白质沉淀核酸三、实验试剂1. 抽提缓冲液:100 mM NaCl,10 mM Tris.Cl(pH8.0), 25 mM EDTA(pH8.0), 0.5% SDS,0.1 mg/ml 蛋白酶 K(新鲜加入)各成分的作用:NaCl,Tris.Cl:调节溶液的 pH,维持一定的离子浓度;EDTA:二价金属离子的螯合剂,使影响DNA的 DNA酶中的钙离子和镁离子和EDTA结合,使酶失去活性,有利于提取完整DNA;还可以防止镁离子与核酸生成沉淀。SDS: 去污剂,可溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,和核酸结合,减少和清除蛋白质杂质,保护 DNA免受内源核酸酶的降解。2. 50X 电泳缓冲液 TAE:242g Tris base ,57.1ml 冰醋酸, 37.2g Na2EDTA?2H2O,加 ddH2O至 1000ml 。Na2+:离子浓度太低时电泳速度变慢;EDTA:二价金属离子的螯合剂,使影响DNA的 DNA酶中的钙离子和镁离子和EDTA结合,使酶失去活性,有利于提取完整DNA;还可以防止镁离子与核酸生成沉淀。3. 6XDNA上样缓冲液4. 0.7 %琼脂糖凝胶:0.28g 琼脂糖,加入 40ml 1×TAE,于电炉上加热至沸腾,待冷却至50℃左右(手试微烫),加入 2μ l DNA 荧光染料,混匀后将胶倒入插好梳子的制胶板上,冷却后备用。为什么凝胶用的缓冲液是TAE溶液?因为电泳缓冲液是TAE,那么用 TAE配胶就使胶体中的离子环境与缓冲液相同,使核酸携带的电荷更稳定,条带更加清晰。第 1 页四川大学实验报告题目: 果蝇基因组 DNA的提取四、实验步骤1.10 只果蝇放入 1.5 ml 离心管,加 30 μ l抽提缓冲液,用枪头迅速捣碎; 抽提缓冲液:2. 加 400 μ l抽提缓冲液,混匀, 65℃温浴 30 min ,每 10 分钟重新混匀一次 ; 3. 加等体积(约 430μ l )酚/ 氯仿 / 异戊醇( 25:24:1 ),盖紧管盖,上下颠倒混匀2min,12,000rpm 离心 5 min; 酚:有机溶剂,能使蛋白质变性;氯仿 :抑制核酸酶,提苯酚;异戊醇 :可快速分层,去气泡;4. 上清转移至新的离心管中。加等体积(约400μ l )异丙醇,...

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