试验报告-果蝇基因组DNA的提取

四川大学实验报告题目： 果蝇基因组 DNA的提取果蝇基因组 DNA的提取姓名：学号：一、实验目的1. 掌握动物基因组 DNA抽提的操作过程，了解基因组DNA提取的意义 ; 2. 熟悉 DNA提取的步骤和 DNA电泳原理。二、实验原理1. DNA 是绝大多数生物（除少数RNA病毒外）记录、存储、传递遗传信息的载体; 2. DNA 的提取是进行 PCR扩增、 Southern 杂交、限制性片段长度多态性分析等实验的基础。细胞破碎抽提去蛋白质沉淀核酸三、实验试剂1. 抽提缓冲液：100 mM NaCl，10 mM Tris.Cl（pH8.0）, 25 mM EDTA（pH8.0）, 0.5％ SDS，0.1 mg/ml 蛋白酶 K（新鲜加入）各成分的作用：NaCl，Tris.Cl：调节溶液的 pH,维持一定的离子浓度；EDTA：二价金属离子的螯合剂，使影响DNA的 DNA酶中的钙离子和镁离子和EDTA结合，使酶失去活性，有利于提取完整DNA；还可以防止镁离子与核酸生成沉淀。SDS: 去污剂，可溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，和核酸结合，减少和清除蛋白质杂质，保护 DNA免受内源核酸酶的降解。2. 50X 电泳缓冲液 TAE：242g Tris base ，57.1ml 冰醋酸， 37.2g Na2EDTA?2H2O，加 ddH2O至 1000ml 。Na2+：离子浓度太低时电泳速度变慢；EDTA：二价金属离子的螯合剂，使影响DNA的 DNA酶中的钙离子和镁离子和EDTA结合，使酶失去活性，有利于提取完整DNA；还可以防止镁离子与核酸生成沉淀。3. 6XDNA上样缓冲液4. 0.7 ％琼脂糖凝胶：0.28g 琼脂糖，加入 40ml 1×TAE，于电炉上加热至沸腾，待冷却至50℃左右（手试微烫），加入 2μ l DNA 荧光染料，混匀后将胶倒入插好梳子的制胶板上，冷却后备用。为什么凝胶用的缓冲液是TAE溶液？因为电泳缓冲液是TAE，那么用 TAE配胶就使胶体中的离子环境与缓冲液相同，使核酸携带的电荷更稳定，条带更加清晰。第 1 页四川大学实验报告题目： 果蝇基因组 DNA的提取四、实验步骤1.10 只果蝇放入 1.5 ml 离心管，加 30 μ l抽提缓冲液，用枪头迅速捣碎; 抽提缓冲液：2. 加 400 μ l抽提缓冲液，混匀， 65℃温浴 30 min ，每 10 分钟重新混匀一次 ; 3. 加等体积（约 430μ l ）酚/ 氯仿 / 异戊醇（ 25:24:1 ），盖紧管盖，上下颠倒混匀2min，12,000rpm 离心 5 min; 酚：有机溶剂，能使蛋白质变性；氯仿 ：抑制核酸酶，提苯酚；异戊醇 ：可快速分层，去气泡；4. 上清转移至新的离心管中。加等体积（约400μ l ）异丙醇，...