细胞增殖的检验方法：BrdU 标记法 1、细胞以1
5× 105 /ml 细胞数接种于直径35ml 培养皿中（内放置一盖玻片），培养1 天，用含0
4％FCS 培养液同步化3 天，使绝大多数细胞处于G0 期
2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育 40min
3、弃培养液，玻片用PBS 洗涤 3 次
4、甲醇/醋酸固定 10min
5、经固定的玻片空气干燥，0
3％H2 O2 -甲醇 30min 灭活内源性氧化酶
6、5％正常兔血清封闭
7、甲酰胺 100℃，5min 变性核酸
8、冰浴冷却后 PBS 洗涤，加1 抗即抗小鼠 BrdU 单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS 或血清
9、按 ABC 法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10 个高倍视野中细胞总数及 BrdU 阳性细胞数，计算标记指数（LI）
BrdU 原理： 细胞增殖周期包括 G1、S、G2、M 4 个时期，其中S 期是 DNA 合成期，细胞内DNA 进行半保留复制，各种构成 DNA 的原料掺入到 DNA 中
BrdU 作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物（其化学结构特点是胸腺嘧啶的碱基嘧啶环上与 5 位 C 原子连接的甲基被溴代替），像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA 中
当细胞处于DNA 合成期而同时又有 BrdU 存在时, 就会有BrdU 掺入新合成的DNA 中，只要细胞不消亡，这种BrdU 就在胞核的DNA 中长期存留
掺入到 DNA 的BrdU 可通过抗 BrdU 单克隆抗体在组织切片或细胞爬片上显示
该方法能对细胞周期进行迅速而稳定的测量, 而且标记BrdU 的细胞只要不受到紫外线照射，对细胞本身没有功能损害
该技术可应用到跟踪检测移植细胞的存活、分化和功能状态
MTT: http://w enku
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