细胞增殖的检验方法：BrdU 标记法 1、细胞以1.5× 105 /ml 细胞数接种于直径35ml 培养皿中（内放置一盖玻片），培养1 天，用含0.4％FCS 培养液同步化3 天，使绝大多数细胞处于G0 期。 2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育 40min。 3、弃培养液，玻片用PBS 洗涤 3 次。 4、甲醇/醋酸固定 10min。 5、经固定的玻片空气干燥，0.3％H2 O2 -甲醇 30min 灭活内源性氧化酶。 6、5％正常兔血清封闭。 7、甲酰胺 100℃，5min 变性核酸。 8、冰浴冷却后 PBS 洗涤，加1 抗即抗小鼠 BrdU 单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS 或血清。 9、按 ABC 法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10 个高倍视野中细胞总数及 BrdU 阳性细胞数，计算标记指数（LI）。 BrdU 原理： 细胞增殖周期包括 G1、S、G2、M 4 个时期，其中S 期是 DNA 合成期，细胞内DNA 进行半保留复制，各种构成 DNA 的原料掺入到 DNA 中。 BrdU 作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物（其化学结构特点是胸腺嘧啶的碱基嘧啶环上与 5 位 C 原子连接的甲基被溴代替），像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA 中。当细胞处于DNA 合成期而同时又有 BrdU 存在时, 就会有BrdU 掺入新合成的DNA 中，只要细胞不消亡，这种BrdU 就在胞核的DNA 中长期存留。掺入到 DNA 的BrdU 可通过抗 BrdU 单克隆抗体在组织切片或细胞爬片上显示。 该方法能对细胞周期进行迅速而稳定的测量, 而且标记BrdU 的细胞只要不受到紫外线照射，对细胞本身没有功能损害。 该技术可应用到跟踪检测移植细胞的存活、分化和功能状态。 MTT: http://w enku.baidu.com/view /6e6ec769a45177232f60a243.html （1）单细胞悬液接种于96 孔培养板；103-104 细胞/孔，每孔培养基总量200微升（96 孔培养板每孔容积370 微升），37℃、5％ CO2 培养箱中培养一段时间（根据实验目的决定培养时间） （2）加入 2 毫克／毫升的 MTT 液（50 微升／孔）；继续培养3 小时。 （3）吸出孔内培养液后，加入 DMSO 液（150 微升／孔），将培养板置于微孔板扳荡器上振荡 10 分钟，使结晶物溶解。 （4）酶标仪检测各孔OD 值（检测波长 570 纳米）。 MTT 溶液的配制方法 配制 MTT 时用 PBS（p h=7.4）溶解。PBS 配方：Nacl 8g ＋ Kcl 0.2g ＋ Na2HPO4 1.44g ＋ KH2PO4 0.24g 调 p H 7.4,定容1L。...
