ELISA实验中本底及假阳性产生的原因分析

ELISA 实 验 中 本 底 及 假 阳 性 产 生 的 原 因 分 析 ？ 1. 基 因 工 程 抗 原 与 合 成 肽 抗 原 的 区 别 1.1 基 因 工 程 抗 原 是 抗 原 基 因 在 质 粒 载 体 中 原 核 或 真 核 表 达 的 蛋 白 质 抗 原 ，多 以 大 肠 杆 菌 或 酵 母菌 为 表 达 系 统 。 该 类 抗 原 与 合 成 肽 相 比 具 有 以 下 特 点 ： a.分 子 量 大 。 合 成 肽 采 用 化 学 方 法 制 备 ， 由 于 工 艺 的 局 限 ， 合 成 数 量 有 限 ， 只 能 达 到 数 百 个 氨 基酸 ； 而 利 用 基 因 工 程 制 备 的 抗 原 ， 分 子 量 更 大 。 b.稳 定 性 好 。 包 被 的 抗 原 的 稳 定 性 可 使 试 剂 盒 的 效 期 得 到 保 证 ， 早 期 以 合 成 肽 为 包 被 抗 原 的 试 剂盒 效 期 只 有 3-4 个 月 ， 采 用 基 因 工 程 抗 原 后 效 期 大 大 延 长 了 。 c.基 因 工 程 抗 原 将 特 异 性 抗 原 决 定 簇 基 因 融 合 表 达 ， 表 达 产 物 包 含 更 多 的 抗 原 决 定 簇 ， 可 提 高 试剂 盒 的 灵 敏 度 ， 提 高 检 出 率 。 d.纯 化 难 度 大 。 基 因 工 程 抗 原 的 纯 化 技术难 度 较大 。 1.2 合 成 多 肽 抗 原 是 根据蛋 白 质 抗 原 分 子 的 某一抗 原 决 定 簇 的 氨 基 酸 序列人工 合 成 的 多 肽 片段。合 成 肽 抗 原 有 以 下 特 点 ： a.分 子 量 太小 b.一般只 含 有 一个 抗 原 决 定 簇 c.纯 度 高 d.稳 定 性 差 由 于 基 因 工 程 抗 原 较于 合 成 肽 抗 原 有 无可 比 拟的 优越性 ，ELISA 诊断试 剂 经历了 从合 成 肽 向基 因工 程 抗 原 的 过渡。 就HCV ELISA 试 剂 盒 来讲， 第一代产 品为 合 成 肽 抗 原 ， 主要是 HCV 特 异 性 抗原 决 定 簇 的 肽 片段； 第二代产 品包 被 的 抗 原 既有 基 因 工 程 抗 原 又有 合 成 肽 ， 只 是 当时的 基 因 工 程抗 原 不全， 仅包 括了 HCV 的 核 心区 片段； 第三代产 品基 本 上采 用 了...