H9流感抗原性及免疫原性分析20120222VIP专享

第一章 引言 1 流感概述 流感病毒（influenza virus）属于正粘病毒科（Orthomyxoviridae），流感病毒属，具有囊膜的分节段负链RNA 病毒。病毒内部由单链核糖核酸和核蛋白组成，根据核蛋白(NP)和基质蛋白（M）的抗原性不同，分为A、B 和C 三种类型，它们之间的抗原差异可以通过可以通过琼脂扩散试验验证。三种类型的病毒由于在结构方面存在较大差异，致病性方面也有不同。 1.1 第二章 27株流感病毒的免疫原性分析 1 材料与方法 1.1 病毒分离株 27 株 H9N2 流感病毒分离株均由上海兽医研究所流感实验室鉴定并保存。病毒具体信息见表 1 表 1 27 株 H9N2 流感病毒分离表 采样地点 病毒名称 采样地点 病毒名称 上海 Ck-Shanghai-1-06 广东 Ck-Guangdong-1214-09 Ck-Shanghai-2-04 Ck-Guangdong-1258-09 Ck-Shanghai-4-06 Ck-Guangdong-1351-09 Ck-Shanghai-5-03 Ck-Guangdong-1494-09 Ck-Shanghai-6-03 Ck-Guangdong-1683-09 Ck-Shanghai-50-09 江苏 Ck-Jiangsu-825-09 Ck-Shanghai-96-09 Ck-Jiangsu-925-09 Ck-Shanghai-169-09 湖南 Ck-Hunan-2106-09 Ck-Shanghai-340-09 Ck-Hunan-2230-09 Ck-Shanghai-441-09 Ck-Hunan-2351-09 Ck-Shanghai-510-09 山东 Ck-Shandong-2552-09 安徽 Ck-Anhu-1-10 Ck-Shandong-2567-09 吉林 Ck-Jilin-3-09 福建 Dk-Fujian-1753-09 F 株 Vaccine 1.2 SPF 鸡胚和SPF 鸡 SPF 鸡胚购自北京梅里亚公司，SPF 鸡饲养于负压隔离其中。 1.3 H9N2 流感病毒的鉴定 血清学鉴定：流感病毒分离阳性血清 H3、H4、H5、H9 和H10 标准阳性血清由本实验室制备并保存。 PCR 鉴定：在所收集的尿囊液有血凝，而不能和标准阳性血清进行中和反应的毒株，分别提取尿囊液 RNA，反转录形成cDNA 后用流感病毒的PCR 方法进行鉴定。 1.4 H9N2 流感病毒的有限稀释法纯化及 EID50 测定 实验用 27 株 H9 流感病毒分别应用有限稀释法进行纯化，方法：吸取病毒尿囊液 50μl加入到含青霉素 1000U/ml，链霉素 1000U/ml 的 450μl PBS 中，依次进行 10 倍比稀释，然后以不同稀释倍数的病毒液接种 9～11日龄 SPF 鸡胚，每枚 100μl，平行 3 胚。接毒后鸡胚继续孵化箱中孵育 48h 后测定血凝，收取并保存最高稀释倍数具有最高血凝价的鸡胚尿囊液，用于下一轮纯化。如此连续经过 3 次纯化后，把最后收取的尿囊液 105 稀释，再次以 100μl接...