暑 期 实 验 生 化 部 分 一 实 验 目 的 1． 了 解 基 本 的 分 离 提 纯 蛋 白 质 的 原 理 方 法 和 技 术
2． 提 取 分 子 和 微 生 物 实 验 中 自 制 重 组 细 菌 产 生 的 蛋 白 质 HSP16
3． 测 定 HSP16
3 的 分 子 活 性 ， 了 解 其 分 子 伴 侣 活 性 及 寡 聚 结 构
4． 提 纯 和 检 测 Tag 酶 蛋 白
二 背 景 介 绍 1． HSP16
3 HSP16
3 是 来 自 结 核 杆 菌 M
tuberculosis 的 小 分 子 量 热 休 克 蛋 白 (430bp)
3 在正 常 条 件 下 仅 有 少 量 表 达 ， 当 M
tuberculosis 从 对 数 期 到 稳 定 期 的 转 变 中 显 著 表 达 ， 并 成为 细 胞 内 的 主 要 蛋 白
另 外 ， HSP16
3 还 是 M
tuberculosis 很 强 的 抗 原 性 蛋 白 ， 是 T， B 细胞 发 生 免 疫 反 应 的 重 要 靶 点
体 外 实 验 表 明 ， HSP16
3 具 有 分 子 伴 侣 的 活 性 ， HSP16
5℃ 时 可 以 抑 制 柠 檬 酸 合 成 酶 的 热 聚 集 ， 且 其 活 性 不 依 赖于ATP， 但不 能保护柠 檬 酸 合 成酶 的 活 性 ， 说明 HSP16
3 是 与部 分 去折叠的 柠 檬 酸 合 成 酶 发 生 作用， 体 内 蛋 白 的 再折叠可 能还 需要 其 它蛋 白 参与
通过凝胶层析还 可 分 离 出HSP16
3 与柠 檬 酸 合 成 酶 形成 的 复合 物 ， 并在 随后的 SDS-PAGE 中 得到 证实
3 可 能是 通过暴露疏水表 面来 行使其
