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免疫细胞化学技术

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免疫细胞化学技术 免疫细胞化学,与免疫组织化学(Immunohistochemistry)相同,它 是组织化学的分支,它是用标记的特异性抗体(或抗原)对组织内抗原(或抗体)的分布进行组织和细胞原位检测技术。 免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。 抗原和抗体的要求 · 具有特异性高和亲和力强的抗体是实验成功的首要条件。 – 对抗体的要求:纯度高、比活性强; · 高度特异性抗体的获得,取决于抗原的纯度。 – 对抗原的要求:纯度高,免疫原性强,稳定无变化。 抗原 (antigen, Ag) · 抗原的概念:凡是在机体内引起体液免疫和(或)细胞免疫反应的物质,称为抗原。抗原具有两个方面的特性: – 免疫原性:引起机体产生抗体和(或)致敏淋细胞的特性; – 免疫反应性:抗原能与相应的抗体及致敏淋巴细胞发生特异的结合或反应的特性。 · 根据抗原是否显示免疫原性分为: – 完全抗原:分子量较大,一般在10kDa 以上,并具有较复杂的化学组成。 · 免疫原性最强的是蛋白质抗原,多糖次之;脂类和核酸必需和蛋白质及多糖形成复合物才具有良好的免疫原性。 – 半抗原:又称为不完全抗原,分子量较小。例如:某些短肽、多糖、类脂和药物等。 · 半抗原必需与载体结合,才能获得免疫原性。 载 体 · 通常是具有高度免疫原性的大分子物质,具有将免疫原性传递给耦联的半抗原能力。 – 常用的载体有钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)、卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)等。 – 用戊二醛或碳化二亚胺作为交联剂通过功能基团-NH2、-COOH 等将半抗原结合到载体上。结合比例为5kDa 结合5~25个分子的小肽。 (三)抗体 (antibody , Ab) 1、抗体的概念: 免疫球蛋白 · 机体受到抗原刺激后,由浆细胞合成并分泌出一类具有与抗原发生特异性结合的球蛋白,被称为抗体。 – 抗体主要存在于血清内; – 抗体都是免疫球蛋白,但免疫球蛋白并不一定都是抗体。 – 免疫球蛋白根据重链的结构及抗原特异性不同分为五种,既 IgG、 IgD、IgE、 IgA、IgM。 2、免疫组化实验中常用的抗...

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