外源DNA残留量测定(荧光定量PCR法)标准操作规程SOP

外源性 DNA 残留量测定法（荧光定量 PCR 法）标准操作规程文件编码：XXXXXX1.目的 12.范围 13.职责 14.依据 15.定义 16.内容 16.1.原理 16.2.实验材料 16.3.操作步骤 36.4.结果计算 66.5.判定标准 76.6.注意事项 77.相关文件 78.附件 79.变更历史 7外源性 DNA 残留量测定法（荧光定量 PCR 法）标准操作规程文件编码：SOPO3O2O25-O1 第 3 页/共 7 页外源性 DNA 残留量测定法（荧光定量 PCR 法）标准操作规程文件编码：SOP030202外源性 DNA 残留量测定法（荧光定量 PCR 法）标准操作规程文件编码：SOP030202文件编码：SOP030202623.仪器与用具荧光定量 PCR 仪、无菌 1.5/2.0ml 低吸附离心管（PCR 级洁净）、离心机、洁净工作台、涡旋混合仪、水浴锅、移液器、防气溶胶带滤芯移液器吸头、磁力架（AppliedBiosystems）、荧光定量 PCR 反应管/板。6.3.操作步骤6.3.1.标准曲线稀释取已分装的 CHO 细胞 DNA 国家标准品,用 TE 缓冲液稀释到 3x10spg/ml 后，按下表分别进行 10 倍梯度稀释。Tube 编号稀释方法DNA 浓度(pg/ml)SD1/3x105SD250ylSD1+450MTE3x104SD350ylSD2+450MTE3x103SD450ylSD3+450MTE300SD550ylSD4+450MTE30SD650ylSD5+450MTE36.3.2.样品处理根据各品种项下具体要求，进行样品处理；如需采用试剂盒对样品进行残留 DNA提取，应按以下步骤进行：n.V'M 待测样品：根据各品种项下规定，取待测样品 100 卩 1 或 200 卩 1 于 2.0ml 的离心管，一般每批样品做三个平行。h.—加标样品：取待测样品 100 卩 1 或 200 卩 1 于 2.0ml 的离心管，并加入适量阳性DNA，DNA 加入量应约为样品 DNA 含量的 2~10 倍。63.2.3.提取阴性对照（NEG）：取 100 卩 1 或 200 卩 1 的 TE 缓冲液于 2.0ml 的离心管，作为提取阴性对照。外源性 DNA 残留量测定法（荧光定量 PCR 法）标准操作规程文件编码：SOP030202文件编码：SOP030202心「.4 以上各管加入 10 卩 1（每 100 卩 1 样品）的 NaCl 溶液，调整盐离子的含量。63.2.5.蛋白酶处理：各管加入蛋白酶 K 混合液 70 卩 1（每 100 卩 1 样品），其中含蛋白酶 K10 卩 1、蛋白酶 K 缓冲液 60 叭 56°C 水浴 30 分钟。『C.hLysisbufferSolutionMix 的配制：Glycogen（5mg/m1）180 卩 1、tRNA（10mg/m1）4pl、LysisBuffer7600pl 混匀，每管各加入 360 卩 1（每 100^1 样品）。h...