BPG层析柱标准装柱流程规范

精品文档---下载后可任意编辑目的：为了使 BPG300 层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作法律规范。范围：配合 ÄKTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。责任人：层析工序操作人员标准操作程序：1 基本术语概念填料因子（Packing Factor, PF）：指在在装柱过程中，用低流速（如 60cm/h）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度（柱高）的比值，GEHC 生产的各种常见填料的 PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA》；线性流速（linear flow rate）：单位时间内液体流经的直线距离，常用 cm/h 表示；体积流速（volume flow rate）：单位时间内液体流经的空间容积，常用 ml/min 表示；换算：2 准备工作2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。2.2 确定所用填料及其特性、浓度等以 DEAE Sepharose Fast Flow 填料为例，其填料因子（PF）为 1.15，新填料（slurry）浓度为 75%（保存于 20%乙醇中），耐压 3bar。2.3 确定放大后的工艺参数以 XX 生化制药股份有限公司的放大工艺为例，中试工艺参数：柱高 h=10cm；体积流速 v1=3ml/min；柱内径 d=1.6cm.即，线性流速 v2=v1/s 柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min；样品与填料接触时间；在工艺的线性放大中 h、v2 和 t 均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。使用 BPG300 层析柱进行放大的工艺参数：装柱体积 V 柱= S 柱h=3.14×1.52×1L=7L；装柱需要 slurry 体积 Vslurry=V 柱×PF/Cslurry以 DEAE Sepharose Fast Flow 为填料，则，Vslurry；装入柱中的 slurry 高度 Lslurry=Vslurry/S 柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm.3 管路安装3.1 层析柱管道和配件安装3 卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或 20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头 O 型圈；3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二通阀；3 在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至 ÄKTAprocess 上端连接口COLUMN TOP，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至 ÄKTAprocess 的下端连接口COLUMN BOTTOM。图 1、BPG300 层析柱安装示意图3.2 层析柱下端筛网排...