精品文档---下载后可任意编辑DFNA64 小鼠模型的建立与鉴定的开题报告一、讨论背景和意义：耳聋是一种常见的遗传性听力障碍，临床表现为听力损失或完全听力丧失。其中遗传性非综合征性耳聋（non-syndromic hearing loss, NSHL）是最常见的一类耳聋，约占耳聋病例的 70%以上。据统计，全球约有 4660 万人受到严重听力损失或失聪的影响，其中 NSHL 患者占了三分之二。DFNA64 是一种非综合征性耳聋，是由于 GJB2 基因突变引起的。GJB2 基因编码着 connexin 26 蛋白，是一种细胞间通讯蛋白，能够形成细胞间通道，使得基底细胞之间的离子（如钠、钾、氯等）和分子得以传递。已经证实，GJB2 基因的突变是引起 DFNA64 的主要原因。然而，DFNA64 的耳聋发生机制尚未完全了解，建立可复制的 DFNA64 模型将对深化讨论 DFNA64 的发病机制、治疗和预防等方面具有重要意义。二、讨论内容和方法：本讨论将采纳 CRISPR/Cas9 技术构建 DFNA64 小鼠模型。具体方法如下：1.设计 sgRNA：根据 GJB2 基因外显子序列设计 sgRNA，使其与GJB2 基因外显子发生靶向性的双链断裂。2.构建质粒：将向导 RNA、CRISPR/Cas9 等基因组装成质粒。3.体外转录翻译：将 CRISPR/Cas9 基因组装成的质粒进行体外转录翻译，得到合适浓度的 CRISPR/Cas9 蛋白。4.转染次数验证：通过 PCR 检测靶向外显子的突变情况，统计突变效率。5.筛选小鼠：将得到靶向 GJB2 基因突变小鼠胚胎移植入雌鼠体内，诞生小鼠后进行筛选，确定 GJB2 基因突变小鼠。6.鉴定 DFNA64 小鼠模型：通过小鼠的听力检测、组织学和电生理学等方面鉴定小鼠是否达到 DFNA64 的模型。三、预期结果：本讨论将成功构建 DFNA64 小鼠模型，通过模型的建立，将深化讨论 DFNA64 的发病机制、改善耳聋的药物筛选、基因治疗等方面，提高治疗耳聋的效果，为 NSHL 的治疗提供新的思路。
