植 物 体 内 可 溶 性 蛋 白 质 含 量 的 测 定 植 物 体 内 的 可 溶 性 蛋 白 质 含 量 是 一 个 重 要 的 生 理 生 化 指 标 ， 如 在 研 究 每 一 种酶 的 作 用 时 常 以 比 活 (酶 活 力 单 位 ／ 毫 克 蛋 白 质 ， unIT／ Mg ProTeIn)表 示 酶 活 力大 小 及 酶 制 剂 纯 度 ， 这 就 需 要 测 定 蛋 白 质 含 量 。 常 用 的 测 定 方 法 有LoWry 法 和考 马 斯 亮 蓝 G－ 250 染 色 法 ， 本 实 验 将 分 别 介 绍 这 两 种 方 法 。 方 法 一 ： LoWry 法 (劳 里 法 ) 【 原 理 】 LoWry 法 是 双 缩 脲 法 (BIureT)和 福 林 酚 法 (Ｆ olIn－ 酚 )的 结 合 与 发 展 。其 原 理 是 蛋白 质 溶 液 用 碱 性 铜 溶 液 处 理 后 ，碱 性 铜 试 剂 与 蛋 白 质 中 的 肽 键 作 用 产 生 双 缩 脲 反应 ， 形 成 铜 —蛋 白 质 的 络 合 盐 。 再 加 入 酚 试 剂 后 ， 在 碱 性 条 件 下 ， 这 种 被 作 用 的蛋 白 质 上 的 酚 类 基 团 极 不 稳定 ， 很容易还原 酚 试 剂 中 的 磷钨酸和 磷钼酸(PHosPHoMolyBdATe ＆ PHosPHoTungsTATe)， 使之生 成 磷钨蓝 和 磷钼蓝 的 混合 物 。 这 种 溶 液 蓝 色 的 深浅与 蛋 白 的 含 量 成 正相关， 所以 可 以 用 于蛋 白 质 含 量 的测 定 。 LoWry 法 除使肽 链中 酪氨酸、色 氨酸和 半胱氨酸等显色 外， 还使双 缩 脲法 中 肽 键 的 显色 效果更 强 烈 ， 其 显色 效果比 单 独 使用 酚 试 剂 强 3～ 15 倍 ， 约 是 双缩 脲 法 的 100 倍 。 由 于肽 键 显色 效果增 强 ， 从 而 减 少 了 因 蛋 白 质 种 类 不 同 引 起 的偏 差 。 LoWry 法 适 于微 量 蛋 白 的 测 定 ， 对 多 个 样 品 同 时 测 定 较 为 方 便 。 但 对 不溶 性 蛋 白 和 膜 结 合 蛋 白 必 须 进 行 预 处 理 (如 加 入 少 量 的 SDS)。 1.双 缩 脲 法 的 原 理 双 缩 脲 (NH2-CO-NH-CO-NH2)在 碱 性 溶 液 中 可 与 铜 离 子 产 生紫 红 色 的 ...
