植 物 体 内 可 溶 性 蛋 白 质 含 量 的 测 定 植 物 体 内 的 可 溶 性 蛋 白 质 含 量 是 一 个 重 要 的 生 理 生 化 指 标 , 如 在 研 究 每 一 种酶 的 作 用 时 常 以 比 活 (酶 活 力 单 位 / 毫 克 蛋 白 质 , unIT/ Mg ProTeIn)表 示 酶 活 力大 小 及 酶 制 剂 纯 度 , 这 就 需 要 测 定 蛋 白 质 含 量
常 用 的 测 定 方 法 有LoWry 法 和考 马 斯 亮 蓝 G- 250 染 色 法 , 本 实 验 将 分 别 介 绍 这 两 种 方 法
方 法 一 : LoWry 法 (劳 里 法 ) 【 原 理 】 LoWry 法 是 双 缩 脲 法 (BIureT)和 福 林 酚 法 (F olIn- 酚 )的 结 合 与 发 展
其 原 理 是 蛋白 质 溶 液 用 碱 性 铜 溶 液 处 理 后 ,碱 性 铜 试 剂 与 蛋 白 质 中 的 肽 键 作 用 产 生 双 缩 脲 反应 , 形 成 铜 —蛋 白 质 的 络 合 盐
再 加 入 酚 试 剂 后 , 在 碱 性 条 件 下 , 这 种 被 作 用 的蛋 白 质 上 的 酚 类 基 团 极 不 稳定 , 很容易还原 酚 试 剂 中 的 磷钨酸和 磷钼酸(PHosPHoMolyBdATe & PHosPHoTungsTATe), 使之生 成 磷钨蓝 和 磷钼蓝 的 混合 物
这 种 溶 液 蓝 色 的 深浅与 蛋 白 的 含 量 成 正相关, 所以 可 以 用 于蛋 白 质 含 量 的测 定
LoWry 法 除使肽 链中 酪氨酸、色 氨酸和 半胱氨酸等显色 外, 还使双 缩 脲法 中 肽 键 的 显色 效果更 强 烈 , 其 显色 效果比 单 独 使用 酚 试 剂 强 3~ 15 倍 , 约