精品文档---下载后可任意编辑pEGFP--hTERT 转染鸡胚胎干细胞建系的讨论的开题报告讨论背景和意义：鸡胚胎干细胞 (chESC) 是从内细胞团 (inner cell mass，ICM) 中分离出来的细胞种群，具有自我更新和多潜能分化能力。它们可以对胚胎发育进行基础讨论，也可以在鸟禽繁殖和育种方面应用。然而，目前对 chESC 转录组和表观遗传学的认识远远不够，这对于了解 chESC 的生物学本质、确定繁殖和育种的潜力极其重要。人类端粒酶逆转录酶 (hTERT) 是细胞衰老和增值过程中的关键催化剂，其过表达可以逆转细胞衰老过程并促进增值。讨论表明，hTERT 在维持 ESC 的自我更新和多潜能性方面具有重要作用。在鸡胚胎和胎儿阶段，hTERT 表达水平较高，因此，将 hTERT 引入 chESC 可能有助于维持其自我更新和多向分化潜能力。目的和内容：本讨论旨在构建一个稳定的 pEGFP--hTERT 载体，并将其转染到 chESC 中。我们将通过对转染后细胞的观察，确定 hTERT 在 chESC 中的表达模式和其对细胞自我更新和多潜能性的影响。在此基础上，我们将进一步讨论 hTERT 作用的分子机制，以深化了解 chESC 定向分化的调控机制，为鸟禽繁殖和育种提供科学依据。讨论方法：1. 构建 pEGFP--hTERT 载体并纯化。2. 将 pEGFP--hTERT 载体转染到 chESC 中。3. 利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白 (GFP) 的表达情况，并通过定量 PCR 确定 hTERT 的表达模式。同时，记录转染前后细胞的增殖和形态变化。4. 在转染后的 chESC 中，利用体外定向分化实验和单细胞克隆形成实验，讨论 hTERT 对细胞自我更新和多潜能性的影响。预期结果：1. 成功构建并纯化 pEGFP--hTERT 载体。精品文档---下载后可任意编辑2. 成功将 pEGFP--hTERT 载体转染到 chESC 中，荧光显微镜观察到绿色荧光蛋白表达。3. hTERT 表达水平较高的 chESC 细胞株形成。4. 转染后的 chESC 细胞表现出增殖率和形态的变化，并且对定向分化和多向分化的反应有所不同。5. 讨论 hTERT 在 chESC 中的分子机制，阐明其对细胞自我更新和多潜能性的影响，为鸟禽繁殖和育种提供科学依据。讨论意义：本讨论将有助于深化了解 chESC 的生物学本质和繁殖和育种的潜力，为鸟禽产业注入新的生产力。同时，讨论的方法和技术，对于更深化的转录组和表观遗传学讨论具有借鉴意义。
