精品文档---下载后可任意编辑RKTG 基因剔除小鼠模型的建立及功能分析开题报告一、选题背景RKTG 基因(Raf Kinase Trapping to Golgi)又称 FLJ22609,是在人类小肺癌组织中筛选到并克隆的一种新的抑癌基因。讨论发现,RKTG 基因能够通过引导 Raf-1 激酶到高尔基体分泌途径中的内质网-高尔基体中转运,从而抑制 Raf-1 激酶的活性,从而形成 RKTG 蛋白的保守功能。RKTG 基因的缺失或低表达与许多肿瘤的发生进展和转移有关。为了讨论 RKTG 基因的生物学功能和机制,目前已经建立了多种RKTG 基因敲除小鼠模型。然而,这些模型中的某些基因缺失影响了小鼠正常的发育和生长,导致了实验结果的误差。因此,需要建立一种新的完全敲除 RKTG 基因的小鼠模型,以更加准确地讨论 RKTG 基因的生物学功能和机制。二、讨论目的和意义本讨论旨在利用 CRISPR/Cas9 基因编辑技术,建立一种完全敲除RKTG 基因的小鼠模型,并对此模型进行功能分析,从而确定 RKTG 基因在小鼠生长和发育中的生物学功能和机制。本讨论将为深化理解 RKTG基因的功能、探讨其在肿瘤发生和转移中的作用提供新的实验基础。三、讨论内容和方法讨论内容:(1)使用 CRISPR/Cas9 技术敲除小鼠的 RKTG 基因。(2)分别采纳 Western blot 和 RT-qPCR 技术检测敲除后小鼠体内 RKTG 基因蛋白和 RNA 的表达情况,确定敲除效果。(3)对敲除后的小鼠进行生长和发育史迹的观察,通过测量小鼠体重、身长、头臂长等指标评估敲除 RKTG 基因对小鼠生长发育的影响。(4)利用 Western blot 和免疫组织化学等技术检测敲除 RKTG 基因对小鼠体内信号通路、细胞周期、凋亡等方面的影响。讨论方法:本讨论将采纳 CRISPR/Cas9 基因编辑技术建立 RKTG 基因完全敲除的小鼠模型。敲除后,利用 Western blot 和 RT-qPCR 技术检测小鼠体内 RKTG 基因蛋白和 RNA 的表达情况,确定敲除效果。同时,对敲除后的小鼠进行生长和发育史迹的观察,通过测量小鼠体重、身长、头臂精品文档---下载后可任意编辑长等指标评估敲除 RKTG 基因对小鼠生长发育的影响。最后,利用Western blot 和免疫组织化学等技术检测敲除 RKTG 基因对小鼠体内信号通路、细胞周期、凋亡等方面的影响。四、预期成果和讨论难点预期成果:本讨论将成功建立一种完全敲除 RKTG 基因的小鼠模型,并对此模型进行生长和发育指标的观察和免疫学和分子生物学实验,从而深化探讨 RKTG 基因在...