精品文档---下载后可任意编辑下调 GRP78 对肝癌细胞株 HepG2 自噬的影响的开题报告一、讨论背景和意义肝癌是一种高度恶性的肿瘤疾病，具有高死亡率和高度侵袭性的特点，常有晚期诊断和复发等问题。目前，治疗肝癌的方法主要包括手术切除、肝癌化疗和介入治疗等，但都存在一定的限制。因此，寻找新的肝癌治疗方法具有重要的临床意义。自噬是一种细胞自我保护的机制，能够清除细胞内的有害垃圾物质和细胞内已经损坏的蛋白质等，对于肿瘤细胞的维持和生存有着重要的影响。已有的讨论证实，降低肝癌细胞的自噬水平可以提高其敏感性和减少其侵袭性。因此，降低肝癌细胞自噬水平可以作为治疗肝癌的一种新方法。GRP78 是一种内质网中的重要分子，具有调节蛋白折叠和解折叠、调节离子通道和细胞黏附等功能。最近的讨论发现，GRP78 可以调节肝癌细胞的自噬水平，因此，下调 GRP78 可以降低肝癌细胞的自噬水平，从而提高肝癌细胞的敏感性和减少其侵袭性。因此，本讨论旨在探讨下调 GRP78 对肝癌细胞株 HepG2 自噬的影响，为开发新的肝癌治疗方法提供实验依据。二、讨论内容和方法本讨论将选择肝癌细胞株 HepG2 作为讨论对象，通过用 siRNA 技术降低 GRP78 水平，观察 GRP78 对肝癌细胞自噬的影响。具体讨论内容和方法如下：1. 细胞培育将肝癌细胞株 HepG2 分别分装于 35mm、6 孔和 96 孔培育板中，使用含有 10%的胎牛血清和 1%青霉素/链霉素的 DMEM 培育基进行培育，温度为 37℃、湿度为 5%CO2。使用 cell counter 检测细胞数目。2. 下调 GRP78使用 siRNA 技术下调 GRP78 表达水平，将肝癌细胞株 HepG2 培育在 24 孔培育板中，分别加入 GRP78 siRNA 和 CTRL siRNA 进行转染，观察自噬水平的变化。3. Western Blot 检测自噬相关蛋白表达水平精品文档---下载后可任意编辑将细胞进行裂解后，使用 Western Blot 仪器检测自噬相关蛋白的表达水平，包括 LC3B、ATG5、ATG12、p62 等蛋白。4. 细胞活性实验使用 MTT 法检测肝癌细胞株 HepG2 的活性和细胞凋亡情况，观察下调 GRP78 对其活性的影响。五、项目进度安排本讨论计划从 2024 年 1 月开始，估计于 2024 年底完成实验部分的工作，然后进行数据分析和论文撰写。具体进度安排如下表：| 时间 | 任务内容 || ---- | --------------------------------------------------- || 2024 年 1 月-2 月 | 细胞培育和 MAP 下调 ...
