精品文档---下载后可任意编辑骨髓、脐血间充质干细胞体外诱导分化为肝样细胞的开题报告一、讨论背景与意义肝细胞在生理和病理状态下起着至关重要的作用。肝细胞缺失或机能障碍严重影响机体代谢功能，造成严重疾病和甚至死亡。肝细胞移植是目前治疗肝功能衰竭的主要手段之一，但受限于供体来源和免疫排斥等问题。因此，开发有效的肝细胞替代治疗方案成为当前讨论的热点之一。干细胞具有自我更新和多向分化潜能，成为替代治疗的有力候选。骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）具有多向分化潜能，可分化为骨、脂肪、软骨、肌肉等不同类型的细胞。近年来，讨论表明 MSCs 还能分化为肝样细胞，并有望作为一种新兴的肝细胞替代治疗方案。脐血亦是重要的干细胞来源之一，其中包含较多的 MSCs 和造血干细胞。脐血来源的 MSCs 具有与骨髓 MSCs 相似的多向分化潜能，且猎取方便、无痛苦和数量充足。因此，本文讨论以骨髓和脐血中提取的 MSCs 为讨论对象，通过体外诱导分化，将 MSCs 分化为肝样细胞，为脱离供体来源限制的肝细胞替代治疗提供基础讨论。二、讨论内容与方法本讨论的主要包括以下两个部分：1. 骨髓和脐血中 MSCs 的提取和培育通过梅毒鞭毛虫协同骨髓巨噬细胞分离离心分离法分离骨髓，采纳离心分离法分离脐血细胞，提取 MSCs。通过光镜观察和流式细胞术鉴定 MSCs 的表型特征，包括CD105、CD73、CD90 等表面分子的表达以及 CD45、CD34 等造血、免疫细胞特异性表面分子的消极表达。2.骨髓和脐血 MSCs 体外诱导分化为肝样细胞将培育好的 MSCs 分别在含有肝细胞分化诱导因子的培育基中进行诱导分化，观察和比较诱导效果并检测分化后细胞的相应标志物和功能。包括细胞形态与生长情况、特异肝细胞标志物 ALB、AFP、CK18 的表达水平、肝细胞代谢酶如谷草转移酶（AST）、丙氨酸转移酶（ALT）活性的动态变化等。三、预期讨论结果估计本讨论能够成功提取和培育出不同来源的 MSCs，通过不同的肝细胞分化诱导因子诱导，成功分化出肝样细胞。比较骨髓和脐血 MSCs 的分化效果和筛选优良的分化诱导方案，为后续开展更深化的实验和临床讨论提供基础支撑。
