《生物反应工程》实验讲义及实验报告 朱建良 曹飞 班级： 学号： 姓名： 成绩： 南京工业大学制药与生命科学学院 2004.06 实 验 一 游 离 酶 与 固 定 化 酶 酶 学 性 质 比 较 实 验 目 的 ： 掌 握 测 定 酶 动 力 学 参 数 的 实 验 方 法 ， 作 图 法 计 算 酶 动 力 学 参 数 ， 掌 握 固 定 化 酶 的 方 法 ， 以 及 固定 化 酶 后 动 力 学 参 数 的 变 化 。 实 验 原 理 ： 要 建 立 一 个 完 整 的 酶 动 力 学 方 程 ， 必 须 要 通 过 动 力 学 实 验 确 定 其 动 力 学 参 数 。 对 M— M方 程 ， 就是 要 确 定 rmax和 Km值 。 但 直 接 应 用 M— M方 程 求 取 动 力 学 参 数 所 遇 到 的 主 要 困 难 在 于 该 方 程 为 一 非 线 性方 程 。 为 此 常 将 该 方 程 加 以 线 性 化 ， 通 过 作 图 法 直 接 求 取 动 力 学 参 数 。 通 常 有 下 述 几 种 作 图 方 法 。 Lineweaver— Burk 法 (简 称 L-B 法 )。 将 M— M 方 程 取 其 倒 数 得 到 下 式 ： srmsCKrr111maxmax+= (1) 以 1／ rs对 1／ Cs作 图 可 得 一 直 线 ， 该 直 线 斜 率 为 Km／ rmax， 直 线 与 纵 轴 交 于 1／ rmax， 与 横 轴 交 于一 1／ Km。 此 法 又 称 双 倒 数 图 解 法 。 Hanes— Woo1f 法 (简 称 H— W 法 )。 将 式 (1)两 边 均 乘 以 Cs 得 到 maxmaxrCrKrCsmss+= (2) 以 Cs／ rs对 Cs作 图 ， 得 一 斜 率 为 1／ rmax的 直 线 ， 直 线 与 纵 轴 交 点 为 Km／ rmax， 与 横 轴 交 点 为 一 Km。 (3)Eadie— Hofstee 法 (简 称 E-H 法 )。 将 M— M 方 程 重 排 为 ssmsCrKrr−=max （ 3） 以 rs对 rs／ Cs作 图 ， 得 一 斜 率 为 一 Km的 直 线 ， 它 与 纵 铀 交 点 为 rmax， 与 横 轴 交 点 为 rmax／ Km。 固 定 化 酶 亦 称 固 相 酶 或 水 不 溶 酶 。 它 是 通 过 物 理 或 化 学 的 方 法 使 溶 液 酶 转 变 为 在 一 定 的 空 间 内其 运 动 受 到 完 全约束、...
