实验六肝糖原的提取

实验六 肝糖原的提取、鉴定与定量 （生物化学实验操作考核卷） 姓名 ，学号 ， 专业， 级 班 组， 月 日 目的要求： 1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。 2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。 3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。 4. 熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。 5. 正确掌握溶液转移的操作。 6. 正确操作使用分光光度计。 实验原理： （一）肝糖原的提取、鉴定 糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用 95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。 糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。 CuSO4 十2NaOH ═ Na2 SO4+Cu(OH)2↓ 2Cu(OH)2 十C6H12O6 ═ 2CuOH 十氧化型葡萄糖+H2O 2CuOH ═ Cu2O↓(红色)+H2O Cu(OH)2 ═ CuO↓(黑色)+H2O （二）肝糖原的定量 糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。该物质在620nm 处有最大吸收。糖含量在(10100)g 范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。 实验材料： （一）仪器 1. 普通离心机，室温100℃恒温水浴箱（×2），722型分光光度计，精度为10mg级电子天平（×1） 2. 剪刀（×1），镊子（×1），研钵（×1） 3. 试管架（×1），10mL 离心管（×2），（100×15）mm 试管（×6） 4. 刻度吸量管（2mL×1，5 mL×2），1000μ L 微量可调取液器（×1） 5. 100mL 容量瓶（×1） 6. 白瓷反应板（×1） （二）实验样品和试剂 1. 鸡肝。 2. 95％乙醇。 3. 0.31mol/L(5％)三氯醋酸溶液：称取未潮解的三氯醋酸（C2HCl3O2，163.39）5g，...