实验室菌种管理规程 目的:保证菌种合理、有效地使用和保存,最大限度降低变异率,确保菌种的溯源性与稳定性,保证实验室和社会的生物安全
职责:主管负责菌种的出入库保管、保存、分发,组员负责菌种的确认、传代、使用及销毁
范围:本规程适用于实验室菌种的管理,包括菌种的保存、传代、使用及销毁等
1 菌种的保存 1
1 工作用菌种的保存 工作用菌种采用平板低温保存法
将菌种接种在适宜的固体培养基上,待菌生长充分以后,转移至2~8℃冰箱中保存
此法仅用于工作用菌种的短期保存,并应随时检查其污染杂菌和变异等情况,发现异常情况,经应灭活处理后销毁
保存时间为 1 周,超过该期限前挑取单菌落重新于琼脂平板划线活化,若菌落活力下降则从-80℃冰箱中取用甘油冷冻管
2 传代用菌种的保存 采用甘油冷冻管保藏法
1 甘油冷冻管保存法 用无菌接种环轻轻刮平板上的单菌落并接种至适宜的液体培养内,置于适宜的培养条件下培养,菌液充分振荡后取适宜体积加入到已灭菌的冷冻管内,再加入等体积的无菌甘油(浓度40%),即为 20%甘油菌悬液,轻 轻振摇,使内容物充分混合,在-80℃冷冻条件下保存,保存期限为 3 年
每个菌株保存至少 30 个无菌冷冻管
使用时,取出一支放至室温,接种增菌培养或接种至琼脂平板复苏,挑取纯菌落传代或工作用
2 菌种的传代 2
1 工作用菌种的传代 当工作用菌种代数小于 5 时,在规定保存期限内,可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种
取在冰箱 2~8℃保存的工作用菌种用普通琼脂平板传代,并将新传代的培养物替代原有的菌种,作为工作用菌种
也可取用“甘油冷冻管保藏法”保存的菌种,进行复苏,直接作为工作用菌种
菌种每 1 周传代一次,当超过 5 代,须用“甘油冷冻管保藏法”保存的原始菌种传代
2 传代用菌种的传代 首先划线接种确认,根据日常检验工作的需要量,挑