总糖和还原糖的测定

第三章 基础实验 （一）糖化学 实验一 总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂比色法 目的要求 掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。 实验原理 将一定量的碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀： 2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2 + Na2SO4 所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜： 在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应如下： 反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。 COOKCOHHCOHCOONaHCOOKCOHHCOHCOONaHCu(OH) 2 +=Cu + 2H O2COHHCOHHCOOKCOHHCOHCOONaHCu O +=Cu + (CHOH) + 6H O2CHOCH OH4+ (CHOH)COOHCOOH+H CO23COOKCOONa66232 Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O K2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH （氧化亚铜） （淡黄色） 滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。根据样液量可计算出还原糖含量。 试剂和器材 一、试剂 碱性酒石酸铜甲液：称取15g 硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g 亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000ml。 碱性酒石酸铜乙液：称取50g 酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g 亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。 0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g 经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml 容量瓶中，加入5ml 浓 HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。 6mol/LHCl：取250ml 浓 HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。 碘－碘化钾溶液：称取5g 碘，10g 碘化钾溶于100ml 蒸馏水中。 6N NaOH：称取120gNaOH 溶于500ml 蒸馏水中。 0.1%酚酞指示剂。 二、材料 山芋粉 三、器材 电热恒温水浴锅，调温电炉，250ml 锥形瓶，滴定管。 操作方法 一、样品中还原糖的提取 准确称取 2g 山芋粉，放在 100ml 烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入50ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温 20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。过滤，将滤液全部收集在 100ml 的容量瓶中，用...