医学免疫学检验-免疫荧光技术课件

医学免疫学检验-免疫荧光技术课件篇一：免疫荧光技术简介免疫荧光技术简介技术支持|浏览次数：416|时间：2022-2-22PriCells-免疫荧光技术(Immunofluorescencetechnique)1941 年，Coons 等于首次采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术(fluorescentantibodytechnique)。该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。一、荧光免疫技术的概念：免疫荧光技术(Immunofluorescencetechnique)又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。将抗原或抗体用荧光素进行标记，标记的抗原或标记的抗体与相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的荧光素，这种免疫技术称为免疫荧光素技术。免疫荧光细胞化学分直接法、夹心法、间接法和补体法。二、荧光免疫技术分类：(1)荧光抗体显微镜技术：抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。2）免疫荧光测定技术：抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法三、荧光的产生：物质吸收外界能量而进入激发状态，在回复基态时多余的能量以电磁辐射的形式释放，即发光，这种光称为荧光。这种物质，称为荧光素。由光激发所引起的荧光，为光致荧光；由化学反应所引起的荧光，为化学荧光。四、荧光素的荧光特性：（1）停止供能，荧光现象随即终止（2）对光的吸收和荧光的发射具高度选择性入射光波长＜发射光波长（3）荧光效率：荧光效率=发射荧光的光量子数/吸收光的光量子数（4）荧光猝灭现象：荧光素的辐射能力减弱五、常见荧光素：（1）异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate,FITC）:FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。有两种异构体，其中异构体 I 型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。FITC 分子量为 389.4,最大吸收光波长为 490〜495nm，最大发射光波长为 520〜530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC 在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。(2) 四乙基罗丹明(rhodamine,RB200)：RB200 为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，可长期保存。最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为 595~600nm，呈现橘红色荧光。(3) 四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethylrhodamineisothiocynate,TRI...