基因工程原理内容提要1.基因工程又称基因操作、重组 DNA 技术， 是 P。 Berg 等于 1972 年创建的。基因工程技术涉及的基本过程包括“切、连、转、选"。该技术有两个基本的特点∶分子水平上的操作和细胞水平上的表达。 2.基因工程中使用多种工具酶，包括限制性内切核酸酶、DNA 连接酶和其他一些参加 DNA 合成与修饰的酶类。 3.限制性内切核酸酶是基因工程中最重要的工具酶,属于水解酶类。根据限制性内切核酸酶的作用特点,被分为三大类.Ⅱ 类限制性内切核酸酶是基因工程中最常用的酶，该类酶的分子量小,专一性强，切割的方式有平切和交错切, 作用时需要 Mg++作辅助因子， 但不需要 ATP 和 SAM。第一个被分离的Ⅱ类酶是 Hind Ⅱ。 4.连接酶是一类用于核酸分子连接形成磷酸二酯键的核酸酶，有 DNA 连接酶和 RNA 连接酶之分。基因工程中使用的连接酶来自于原核生物，有两种类型的 DNA 连接酶∶E.coliDNA 连接酶和 T4—DNA 连接酶。基因工程中使用的主要是 T4DNA 连接酶，它是从 T4 噬菌体感染的 E.coli 中分离的一种单链多肽酶，既能进行粘性末端连接又能进行平末端连接。 5.载体是能将分离或合成的基因导入细胞的 DNA 分子，有三种主要类型∶质粒 DNA、病毒 DNA、科斯质粒,在这三种类型的基础上，根据不同的目的,出现了各种类型的改造载体。 6.DNA 重组连接的方法大致分为四种: 粘性末端连接、平末端连接、同聚物接尾连接、接头连接法。粘性末端连接法是最常用的 DNA 连接方法，是指具有相同粘性末端的两个双链 DNA 分子在 DNA 连接酶的作用下， 连接成为一个杂合双链 DNA。平末端连接是指在 T4 DNA 连接酶的作用下, 将两个具有平末端的双链 DNA 分子连接成杂种 DNA 分子。同聚物加尾连接就是利用末端转移酶在载体及外源双链 DNA 的 3’端各加上一段寡聚核苷酸, 制成人工粘性末端， 外源 DNA 和载体 DNA 分子要分别加上不同的寡聚核苷酸，如 dA(dG)和dT（dC）, 然后在 DNA 连接酶的作用下， 连接成为重组的 DNA。这种方法可适用于任何来源的 DNA 片段， 但方法较繁, 需要 λ 核酸外切酶、S1 核酶、末端转移酶等协同作用.将人工合成的或来源于现有质粒的一小段DNA 分子(在这一小段 DNA 分子上有某种限制性内切酶的识别序列)， 加到载体或外源 DNA 的分子上, 然后通过酶切制造黏性末端的方法称为接头连接法. 7.基因文库分为基因组文库、cDNA 文库等，是指...
