小鼠星形胶质细胞原代培养及分离纯化实验方案

小鼠星形胶质细胞原代培育及分离纯化实验方案经过相关文献阅读，参考了众多对于小胶质细胞培育方案,对比了不同方案的利弊优缺，整合了相对符合本实验室条件和实验要求的方法，如有其他变更方案,以修改后为准.1. 实验材料与试剂剪 刀 、 小 镊 子 、 小 毛 刷 、 DMEM/F12 培 育 液 、 胎 牛 血 清 、 马 血 清 、0。25％，0。05％胰蛋白酶、PBS液、青霉素、链霉素、培育皿离心管、50 mL 细胞培育瓶、CO2 恒温细胞培育箱、倒置相差显微镜、细胞板、荧光标记二抗、0.4％ Trypan Blue染色液、抗小鼠OX42单克隆抗体和新生SD小鼠等 试剂配比：(1) DMEM 10：10：1DMEM ， 10%FBS ， 10 ％ Horse Serum ， 1% Penicillin/Streptomycin （P/S）(2) DMEM 5：5：1DMEM， 5％ FBS， 5% of Horse Serum， 1％ P/S(3) SERUM FREE MEDIUM +GROWTH FACTORS（DMEM/F12无血清培育基+生长因子）25μg/ml转铁蛋白，10nM生物素，30 nM亚硒酸钠，1μg/ml putrescine(腐胺），5μg/ml胰岛素， 20 nMhydrocortisone(氢化可的松），20 nMprogesterone（孕激素），1％P / S+生长因子（5ng/ ml的血小板衍生生长因子PDGF-AA和5ng / ml碱性成纤维细胞生长因子bFGF）胰蛋白酶/ EDTA溶液0.05％胰蛋白酶+0。02%EDTA在W / O内Ca2+ / Mg2 +的HBSSDMEM/F12 containing 25 μg/ml transferrin, 10 nM biotin， 30 nM sodium selenite， 1 μg/ml putrescine, 5 μg/ml insulin， 20 nM hydrocortisone， 20 nM progesterone, 1％ P/S + Growth Factors (5 ng/ml PDGF-AA and 5 ng/ml bFGF）Trypsin/EDTA solution 0。05％ Trypsin + 0，02％ EDTA in HBSS w/o Ca2+/Mg2+  Laminar flow hood Dissecting magnifying glass Water bath at 37ºC Humidified tissue culture incubator （37ºC， 5％ CO2）  Sterilized microdissecting instruments： large dissecting scissors, mouse—teeth forceps, curved forceps and fine Dumont forceps Orbital Shaker （Boeco OS 20）  Tabletop centrifuge 50 ml plastic conical tubes （Sarstedt, 62.547.004）  T75 cm2 tissue culture flasks with plug-seal （BD Falcon， 137787）  Tissue culture plates （Falcon）...