肝糖原的提取、鉴定与定量-实验报告-第四实验室

生物化学实验报告姓 名: 学 号： 专业年级： 2024 级护理本科 组 别: 第四实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称 肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2024-12-20实验地点第四实验室合作者指导老师评分老师签名批改日期一、实验目的1、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。2、了解离心管和分光光度计使用的原理并掌握操作步骤.3、熟悉吸量管、可调式微量移液器的操作步骤。4、熟悉溶液的转移操作；熟练运用溶液混匀的各种方法(视具体情况，采纳合适的混 匀方法）.5、了解呈色反应。二、实验原理(一） 肝糖原的提取与鉴定 1。糖原的分离采纳研磨匀浆使细胞破裂，用低浓度的三氯醋酸使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶从而使其沉淀，而糖原仍稳定保持在上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故用 95％乙醇溶液将糖原沉淀，再用热水溶解。 2。糖原的鉴定 （1）糖原螺旋链吸附碘分子:糖原水溶液呈乳样光泽，其长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子，呈现出红棕色。 (2）呈色反应——利用葡萄糖的还原性： CuSO4+2NaOH = NaSO4 + Cu(OH)2↓ 2Cu（OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖+ H2O 2CuOH = Cu2O↓(红色) + H2O ④Cu(OH）2 = C u O ↓(黑色）+ H2O(二）肝糖原定量测定 1.糠醛衍生物的生成及其性质糖原的水解产物葡萄糖可以在浓硫酸的作用下生成糠醛衍生物-5-羟甲基呋喃甲醛，其可以和蒽酮生成蓝色的化合物，该物质在 620nm 处有最大吸收. 2。标准对比法进行定量糖含量在 10μg~100μg,溶液颜色的深浅与可溶性糖的含量成正比,利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对比法即可计算出样品中糖原的含量。三、材料与方法：（一）肝糖原的提取与鉴定1.实验材料：(1）样品：鸡肝 （2）试剂：5％三氯乙酸溶液、95％乙醇溶液、蒸馏水、浓盐酸、50％氢氧 （3）仪器和器材：剪刀、天平、镊子、圆纸片、研钵、试管、离心机、刻2.实验流程 鸡肝约 1。5 g，剪碎＋5％CCl3COOH 1 ml化钠溶液、班氏试剂、碘试剂度吸量管（移液管）、微量可调取液器（加样枪）、滴管、白瓷反应板、试管架、恒温水浴箱 研磨至乳状 ＋5%CCl3COOH 3 ml 研磨成肝匀浆全部转入离心管中,离心 3 分钟(4000 r / min）沉淀(弃去） 上清（取 3 ml）＋3ml 95%乙醇，混匀,静置...