1.2 基因工程的根本操作程序学习目标1.简述根底理论讨论和技术进步催化了基因工程。2.简述基因工程的原理和根本步骤。学习重、难点学习重点基因工程根本操作程序的四个步骤。学习难点1.从基因文库中猎取目的基因。2.利用 PCR 技术扩增目的基因。知识要点梳理一、基因工程的根本操作程序1.目的基因的猎取。2.基因表达载体的构建。3.将目的基因导入受体细胞。4.目的基因的检测与鉴定。二、目的基因的猎取1.目的基因：主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。2.基因文库〔1〕基因文库的含义：将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段 ，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。2.3.猎取目的基因的方法〔1〕从基因文库中猎取目的基因〔2〕利用 PCR 技术扩增目的基因①PCR 的含义：是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成技术。② 过程：目的基因受热形成单链，与引物结合，在 DNA 聚合酶 的作用下延伸形成 DNA。③ 方式：指数扩增＝2n〔n 为扩增循环的次数〕。〔3〕人工合成法：假设基因较小，核苷酸序列，可以人工合成。三、基因表达载体的构建1.组成2.功能：〔1〕使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代；〔2〕使目的基因表达和发挥作用。四、将目的基因导入受体细胞1.转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2.导入植物细胞〔1〕方法：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法。〔2〕农杆菌特点① 易感染双子叶植物和祼子植物。②Ti 质粒上的 T DNA 可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体 DNA 上。3.导入动物细胞〔1〕常用方法：显微注射技术。〔2〕常用受体细胞：受精卵。4.导入微生物细胞〔1〕原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。〔2〕对受体细胞的常用处理方法：用 Ca 2+ 处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中 DNA 分子的生理状态〔这种细胞称为感受态细胞〕。五、目的基因的检测与鉴定1.2.个体生物学水平上的检测与鉴定：如一个抗虫或抗病的目的基因导入植物细胞后，是否给予了植物抗虫或抗病特性，需要做抗虫或抗病的接种实验。
