抗人转铁蛋白受体单克隆抗体体外抗瘤效应研究

抗人转铁蛋白受体单克隆抗体体外抗瘤效应讨论【摘要】 目的: 探讨抗人转铁蛋白受体(TfR)单克隆抗体体外抗瘤效应。方法: 采纳 CFSE 染色、 PI Annexin Ⅴ染色和 PI 染色, 通过流式细胞术分析抗人 TfR mAb 对高表达的人肝癌细胞系 HepG2 和人乳腺癌细胞系 MCF 7 增殖、凋亡和周期的影响; 通过 MTT 法检测抗人 TfR mAb 联合化疗药物对 HepG2 和 MCF 7 细胞增殖的抑制作用。结果: 抗人 TfR mAb 能抑制 HepG2 和 MCF 7细胞的增殖, 并诱导其凋亡和 S 期阻滞; 与化疗药物联用可增强其对肿瘤细胞增殖的抑制作用。结论: 抗人 TfR mAb 具有良好的体外抗瘤效应。【关键词】 转铁蛋白受体 单克隆抗体 体外抗瘤效应 转铁蛋白受体, 即 CD71 分子,是细胞获得铁元素的关键性分子。由于 TfR 是细胞增殖所必须的, 而且在快速生长的肿瘤细胞表面稳定性的高表达[1], 因而成为肿瘤生物治疗的一个相对特异性的靶点。针对 TfR 的治疗性抗体进展迅速, 并在体内、 外的抗瘤讨论中取得了良好的效果。但有讨论显示, 不同的 TfR 抗体的生物学活性不尽相同。我室所获得的抗人 TfR 单克隆抗体可以特异性识别人肿瘤细胞表面 TfR胞外端, 并具有较高的亲合力, 前期实验显示其对人红白血病细胞系 K562 具有明显的抗瘤作用。在此我们进一步观察抗人 TfR mAb 对高表达 TfR 的人肝癌细胞系和人乳腺癌细胞系的增殖、 周期和凋亡的影响; 以及与临床常用化疗药物[5氟尿嘧啶、 阿霉素(ADM)]是否存在协同抗瘤作用, 为临床应用讨论提供实验依据。 1 材料和方法 材料 抗人 TfR mAb 为本室所收藏的分泌抗人 TfR 杂交瘤细胞株, 经诱生 BALB/c裸鼠腹水, DEAE Sephadex A 50纯化, SDS PAGE电泳鉴定。羧基荧光素二酯酸盐琥珀酰亚胺酯、 碘化丙啶、 四甲基偶氮唑蓝、 二甲亚砜均为 Sigma 公司产品。PI Annexin Ⅴ细胞凋亡检测试剂盒为南京凯基生物科技进展有限公司产品。5 FU为浙江海正药业有限公司产品。ADM 为法玛西亚有限公司产品。人肝癌细胞系 HepG2 和人乳腺癌细胞系 MCF 7 均由本实验室保存。 方法 CFSE 染色检测肿瘤细胞增殖 分别收集对数生长期的 HepG2 细胞和 MCF 7 细胞, 用冰冷的 PBS 液洗涤 2 次后, 调整细胞密度为5×109/L, 取 1 mL 加入 1 μL CFSE 置于37℃, 孵育 30 min。加入 1 mL 小牛血清终止染色, 再用...