外周血红细胞粒细胞单个核细胞血小板淋巴细胞单核细胞1.030~1.0351.075~1.090Ficoll:1.077±0.001 (PBMC)1.0921500rpm, 20℃ , 30minPBMC红细胞粒细胞Ficoll稀释外周血Ficoll稀释的血浆、血小板外周血 PBMC 的分离原 理外周血各种血细胞的密度不尽相同,利用淋巴细胞分层液(Ficoll)作密度梯度离心,使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。 1.0931. 采血,稀释 (外周血:稀释液=1 :2 )2. 在离心管中加入 Ficoll ,沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血( Ficoll :稀释血=1 :2 )3.18℃ ,1500r/min ,离心30min4. 轻轻吸取PBMC 层移入另一试管中5. 加足量稀释液充分洗涤,1800 r/min 离心5min ,弃上清。每毫升外周血液大约可获1×106 单个核细胞 Ficoll 应适量,外周血应充分稀释 温度直接影响到Ficoll 的比重和分离效果 在Ficoll 上加入稀释外周血时,应缓慢加,以免冲散界面 吸取单个核细胞层时,应避开吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染实验步骤注意事项