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hela细胞的培养传代

hela细胞的培养传代_第1页
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hela 细胞的培育条件为:高糖 DMEM 培育基,100ml/l 胎牛血清;培育液中一般血清含量为 10%传代步骤: 1 . 倒去细胞培育液(对于小口的培育瓶可采纳顷倒方法,对于培育皿,必须用吸管吸出) 2 . 吸取适量的 PBS 加入培育瓶中,轻轻振荡后弃去重复一次,以清于血清成分, 利于胰酶消化3 . 加入适量 0.25%胰蛋白酶(一般 100mm 培育皿可加入 1ml,15cm 培育瓶加入 5-8 滴)转动培育瓶,使其湿润整个细胞房,高温下消化 2-3 分钟。翻转培育瓶,肉眼观察细胞单层,见细胞单层薄膜出现针孔大小空隙时即可顷去消化液,如消化程度不够可延长消化时间,或置于 37°C 孵箱中加速胰酶作用如见大量细胞片装脱落,已消化过头,则不能顷倒消化液而直接进行下一步 操作4 . 加入适量培育液终止消化吸取瓶中培育液反复冲瓶壁上的细胞层,至全部冲下轻轻吹打,混匀,成细胞悬液取样计数,调整细胞浓度为 5′10 /ml 15cm 培育瓶培育时,吸取 1ml 细胞悬液加到新培育瓶中,加入 4ml 培育液,盖好,置 37°C 孵箱中培育。传代的天数要以 HELA 细胞的生长密度为基础,细胞密度大了就要传,应该每天观察 HELA 细胞,注意其生长状态.HELA 细胞的生长分 5 期: 游离期细胞经消化分散后,由于愿生质收缩及细胞弹性,细胞成圆形,折光性强,呈 悬浮状态。 吸附期接种 24 小时后,由于细胞的附壁特性,开始贴壁,圆形细胞变成延展状态。 繁殖期 细胞快速生长、分裂,形成细胞岛直至细胞单层。 维持期细胞形成单层后生长与分裂减缓、折光性减弱,细胞内颗粒增多,由于代谢物的积累,CO2 增多,培育液变黄。 衰退期如不及时换液和传代,由于营养缺乏、代谢物积累,细胞内颗粒进一步增多,立体感差,细胞皱缩、脱落、逐渐衰老死亡。应该在其维持期和衰退期及时换液.一般而言是 4 天换一次液.内容总结(1)hela 细胞的培育条件为:高糖 DMEM 培育基,100ml/l 胎牛血清(2)hela 细胞的培育条件为:高糖 DMEM 培育基,100ml/l 胎牛血清(3)应该在其维持期和衰退期及时换液.一般而言是 4 天换一次液.

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