小鼠单核巨噬细胞 RAW264.7 的消化及传代： RAW264.7 因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢，普通的方法根本就不可能将它消化下来，这也是养这种细胞最头痛的问题。现将我的一点心得，简介如下： 消化液：0.5％胰酶、0.2％EDTA，实验前加温到 37 度 以 50ml 培育瓶为例：1、细胞贴壁生长，长满瓶底 80％时，弃去培育液，加 D-HANKS 漂洗两次；2. 加入含胰酶和EDTA 的消化液 1－2ml,消化 37℃约 2-5min，镜下可见细胞基本圆形回缩即中止消化，弃消化液加 D-HANKS 漂洗两次；3.加入新培育液 10ml 复吹打混悬细胞，按需要分入新的培育瓶 RAW264.7 RAW264.7 因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢。 我得操作如下： 实验前将 DPBS 及 DMEM 加温到 37 度 使用 Flask75 培育瓶： 1、细胞贴壁生长，长满瓶底 70％时，弃去培育液，加 DPBS10ml 漂洗一至两次；弃去 2. 加入 10mlDPBS,然后用 scratcher 轻轻刮即可，离心后去除 DPBS.用 DMEM 培育液10ml 复吹打混悬细胞 3.分入新的培育瓶； 4. 入 37℃5％CO2 孵箱，几小时后即可再贴壁；4. 入 37℃5％CO2 孵箱，几小时后即可再贴壁。我一直是直接用弯嘴滴管吹打的。也不费劲，只要根据顺序一片片地吹打，很容易就能够把该细胞吹打下来。吹打一遍之后，置镜下观察哪里还有未吹下的细胞，再着重吹打。对于 RAW264.7 细胞，他的生长时喜爱结伴的。正常的生长状态应该是一小片一小片地生长。片片之间不连接，等到长的更多更密的时候就会连成大片，并且会叠加成层。所以，要很好地控制好细胞的生长速度，不要等到叠加成层的时候再传代。RAW264.7 细胞传代后贴壁时间比较短，半小时就能贴很多，刚贴壁时细胞呈圆形，折光度很好，镜下观察明亮如小珍珠状一个个地散落于瓶底面。生长一段时间后，部分细胞会变为类似四角形，伸出伪足之类的吧。这个时候其实就是提示你注意传代了，这部分细胞如再不传代，很容易就老化掉。内容总结（1）小鼠单核巨噬细胞 RAW264.7 的消化及传代： RAW264.7 因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢，普通的方法根本就不可能将它消化下来，这也是养这种细胞最头痛的问题（2）片片之间不连接，等到长的更多更密的时候就会连成大片，并且会叠加成层（3）所以，要很好地控制好细胞的生长速度，不要等到叠加成层的时候再传代（4）生长一段时间后，部分细胞会变为类似四角形，伸出伪足之类的吧
