合工大生化实验方案

不同植物样品可溶性蛋白含量和多肽组分的差异一．实验目的与意义1.掌握冷冻离心机的操作使用方法。2.掌握植物可溶性蛋白的提取方法和原理。3.掌握分光光度计的使用方法和原理。4.掌握可溶性蛋白的定量测定方法和原理。5.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理和基本操作过程。二．试剂与仪器试剂：Tris[60g] ，聚乙烯吡咯烷酮（PVP）[5g] ，β-巯基乙醇[2.5ml]，蛋白酶抑止剂（PMSF 苯甲基磺酸氟）；100 μg ／ mL 牛血清白蛋白（ 125mg），考马斯亮蓝 G-250（500mg），90 ％乙醇（250mL），85 ％（ W ／ V ）的磷酸（500mL）；Na2HPO4·12H2O（250g），NaH2PO4·2H2O（50g），SDS（500mg），巯基乙醇（0.5ml）， 甘油（5ml），溴酚蓝（10mg），0.2mol/L pH 磷酸盐缓冲液（3L），Acr （ 150g ） ， Bis （ 10g ） ， TEMED （ 10ml ） ， AP （ 50g ） ， 冰 乙 酸 （ 350ml ） ， 甲 醇（250ml），50%甲醇（2L），冰乙酸（200ml），仪器：研体，烧杯，玻璃棒，量筒（10ml），移液管，1000ml 容量瓶,冰浴，离心机；分光光度计，烧杯，量筒，移液管，试管（8 个），100mL 容量瓶（2 个），1000mL 容量瓶（4 个），棕色瓶，夹心式垂直板电泳槽（附带凝胶模 135×100×1.5mm，1 台/组），直流稳压电源（电压 300—600V，电流 50—100mA），，微量注射器（10 或 50μL），大培育皿（φ120—160mm 1 个），棕色瓶（4 个），三．实验材料马铃薯 根 茎 叶四．试验方法与操作过程不同植物样品可溶性蛋白的提取设备：研体，烧杯，玻璃棒，量筒（10ml），移液管，1000ml 容量瓶,冰浴；试剂：1.提取缓冲液：（0.0125mol 的 Tris-Hcl，pH7.0），称取 12.5gTris 于烧杯，用适量双蒸馏水溶解，HCL 调 PH 至 7.0，定容至 1000Ml.2. 聚乙烯吡咯烷酮（PVP）[5g]3. β-巯基乙醇[2.5ml]4..蛋白酶抑止剂（PMSF 苯甲基磺酸氟）操作步骤：1.将买来的新奇马铃薯整株清洗洁净，分别剪取马铃薯的根 茎 叶。分别准确称取 3g 植物材料于研钵中，加入 10ml 预冷的提取缓冲液（Tris 缓冲液，Ph7.0），1g 聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和 0.5ml 的β-巯基乙醇，可加入蛋白酶抑止剂（PMSF 苯甲基磺酸氟），置冰浴研磨匀浆，至 20 分钟。2、将研磨匀浆转移到塑料离心管并编号，提取液总体积 10ml 左右。先在 4500r/min 下离心 20min，倾出上清液，并测定溶液体积，然后在 10000r／min 条件...