小鼠成纤维细胞原代培养

实验—小鼠成纤维细胞得原代培育一、实验目得１.掌握哺乳动物细胞原代培育与传代培育中得取材、消化及无菌操作等基本实验技术与操作过程。2。熟悉在倒置相差显微镜下观察培育细胞得形态与生长状况得方法．3。了解细胞原代培育与传代培育得原理与方法。二、实验原理自１７世纪下半叶 Rob ｅ rt Hoo ｋｅ提出“细胞"概念直至 2 ０世纪中叶，细胞培育(Cell culture)才逐渐进展起来.现代生命科学以及相关领域得讨论前提就是细胞得维持与增殖，因此,细胞培育不仅就是细胞生物学得密不可分得组成部分,而且已经成为生物化学、生物物理学、遗传学、免疫学、肿瘤学、生理学、分子生物学与神经科学、甚至临床医学得重要内容。细胞培育也就是细胞生物学延伸至相关学科得一条主要途径。如今,细胞培育已经成为生命科学与医学讨论最常用得基础技术之一。细胞培育就是模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下,使其生存、生长、繁殖与传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题得讨论。细胞培育得直接目得就是维持或扩增细胞数量。依据取材于动物组织或培育细胞,细胞培育分为原代培育与传代培育．1.原代培育(p ｒ imary culture)就是从供体取得组织或细胞后在体外进行首次培育直至成功地进行首次传代之前得培育。但实际上通常把第一代至第十代以内得培育细胞统称为原代细胞培育.原代培育就是建立细胞系得第一步,其最基本得方法有两种：组织块培育法与消化培育法.组织块培育法就是指直接从机体取下组织与器官,通过组织块直接长出单层细胞,该培育法就是最常用得原代培育方法，其将刚刚离体得、生长活力旺盛得组织剪成小块接种在培育瓶中作为实验材料，一天后细胞可从贴壁得组织块四周游出并生长。组织块培育法操作过程简便、易行,培育得细胞较易存活，适用于一些来源有限、数量较少得组织得原代培育。消化培育法利用酶或机械方法将组织分散成单个细胞后，在不加任何粘附剂得情况下，直接移植在培育瓶壁上,加入培育基立即进行培育得方法。该方法主要使用生物化学手段将较小体积得动物组织中阻碍细胞生长得间质加以分解、消化，使组织中结合紧密得细胞连接松散、相互分离，细胞失去与间质得连接,活细胞从组织中释放出来形成含单细胞或细胞团得悬液，分散得细胞易与外界进行新陈代谢互动，在短时间内即可贴壁生长成片。胰蛋白酶主要适用于一些间质少、较软得组织如上皮、肝、肾与胚胎等，胶原酶主要适用于纤维组织、一些较硬得癌组织等得...