碱裂解法提取质粒一、基本概念 1
质粒:质粒就是染色体外能够进行自主复制得遗传单位,包括真核生物得细胞器与细菌细胞中染色体以外得脱氧核糖核酸(DNA)分子
现在习惯上用来专指细菌、酵母菌与放线菌等生物中染色体以外得 DNA 分子
在基因工程中质粒常被用做基因得载体
许多细菌除了染色体外,还有大量很小得环状 DNA 分子,这就就是质粒(plasmid)
质粒上常有抗生素得抗性基因,例如,四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等
有些质粒称为附加体(episome),这类质粒能够整合进细菌得染色体,也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外得 DNA 分子
目前,已发现有质粒得细菌有几百种,已知得绝大多数得细菌质粒都就是闭合环状 DNA 分子(简称 cccDNA)
细菌质粒得相对分子质量一般较小,约为细菌染色体得 0、5%～3%
根据相对分子质量得大小,大致上可以把质粒分成大小两类:较大一类得相对分子质量就是 40×106 以上,较小一类得相对分子质量就是 10×106 以下(少数质粒得相对分子质量介于两者之间)
每个细胞中得质粒数主要决定于质粒本身得复制特性
根据复制性质,可以把质粒分为两类:一类就是严紧型质粒,当细胞染色体复制一次时,质粒也复制一次,每个细胞内只有 1～2 个质粒;另一类就是松弛型质粒,当染色体复制停止后仍然能继续复制,每一个细胞内一般有 20 个左右质粒
一般分子量较大得质粒属严紧型
分子量较小得质粒属松弛型
质粒得复制有时与它们得宿主细胞有关,某些质粒在大肠杆菌内得复制属严紧型,而在变形杆菌内则属松弛型
在基因工程中,常用人工构建得质粒作为载体
人工构建得质粒可以集多种有用得特征于一体,如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等
常用得人工质粒运载体有 pBR322、pSC101
pBR322 含有抗四环素基因(Tcr)与抗氨苄青霉素基因(Apr),并含有 5
