分光光度法测定叶绿素含量

分光光度法测定叶绿素含量(10 页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。一、实验目的1.了解植物组织中叶绿素的分布及性质。2.掌握测定叶绿素含量的原理和方法。二、实验原理叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感；在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种：叶绿素 a 和 b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。叶绿素的含量测定方法有多种，其中主要有：1.原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含量，进而间接计算叶绿素的含量。2.分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值，即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。叶绿素 a 和叶绿素 b 在 645nm 和 663nm 处有最大吸收，且两吸收曲线相交于 652nm 处。因此测定提取液在 645nm、663nm、652nm 波长下的吸光值，并根据经验公式可分别计算出叶绿素 a、叶绿素 b和总叶绿素的含量。三、仪器、原料和试剂仪器分光光度计、电子顶载天平(感量 0．01g)、研钵、棕色容量瓶、小漏斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管。原料新奇(或烘干)的植物叶片试剂1. 96％乙醇(或 80％丙酮) 2. 石英砂 3. 碳酸钙粉四、操作步骤取新奇植物叶片(或其它绿色组织)或干材料，擦净组织表面污物，去除中脉剪碎。称取剪碎的新奇样品 2g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3mL95％乙醇，研成均浆，再加乙醇 10mL，继续研磨至组织变白。静置 3～5min。取滤纸 1 张置于漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗，滤液流至100mL 棕色容量瓶中；用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至 100mL，摇匀。取叶绿体色素提取液在波长 665nm、645nm 和 652nm 下测定吸光度，以95％乙醇为空白对比。五、计算根据实验原理中提供的经验公式，分别计算植物材料中叶绿素 a、b 和总叶绿素的含量叶绿素 a= （12.7 A665 -2.69 A645）× 叶绿素 b=（12.7 A645 - 2.69A665）× 总叶绿素 a=（20.0A645 + 8.02 A665 ）× 或总叶绿素 a= 几种叶绿素含量测定方法比较叶绿素含量是植物生长过程...