动物组织中总RNA 的提取(2 页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。动物组织中总 RNA 的提取1、取 20--40mg 的组织，转移至预冷的研钵中，加液氮研磨至粉末；RNA 丰富的组织（如肝脏）不超过 30mgRNA 含量低的组织（如肌肉）不超过 100mg使用组织的量小于 20mg 时R-I，R-II和异丙醇的量都减半使用组织的量小于 40mg 时R-I，R-II和异丙醇的量按比例增加2、向研钵中加入 400μl Buffer-R-I，用装有 21-25 号针头的注射器反复抽吸8-10 次，并转入 1.5ml 离心管（试剂盒内提供）；3、加入 150μl Buffer-R-II，漩涡振荡 15-30s，12000×g 离心 5min；4、取上述上清液至另一 1.5ml 离心管，加入 250μl 异丙醇，混合均匀；5、将制备管置于 2ml 离心管（试剂盒内提供），转移步骤 4 中的混合液到制备管中，6000×g 离心 1min6、弃 掉 滤 液 ， 将 制 备 管 重 新 置 于 2ml 离 心 管 中 ， 加 入 500μl Buffer -W1A，12000×g 离心 1min7、弃 掉 滤 液 ， 将 制 备 管 重 新 置 于 2ml 离 心 管 中 ， 加 入 700μl Buffer -W2，12000×g 离心 1min8、重复操作 79、弃掉滤液，将制备管重新置于 2ml 离心管中，12000×g 离心 1min10、将制备管放入洁净的 1.5ml 的离心管中，在制备管膜中央加 70-100μl Buffer-TE（DNase and RNase-free） 或 RNase-free 水11、室温静置 1min，12000×g 离心 1min，洗脱得到 RNA。
