二代测序及其应用许诗瑶最近几年里，新一代 DNA 测序技术平台在那些大型测序实验室中迅猛进展，各种新技术如雨后春笋般涌现，而其中令人眼前一亮的便是二代测序！那么，究竟何为二代测序呢？让我们先来看看传统测序吧。Sanger 法是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，并且在每个碱基后面进行荧光标记，产生以 A、T、C、G 结束的四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE 胶上电泳进行检测，从而获得可见的 DNA 碱基序列。Sanger 测序法一直以来因可靠、准确，可以产生长的读长而被广泛应用，但是它的致命缺陷是相当慢。所以，这并不是人们想要的理想速度 ，而后，新一代的测序技术应运而生，它们利用大量并行处理的能力读取多个短 DNA 片段，然后拼接成一幅完整的图画。接下来，便来揭开二代测序的神奇面纱。第二代测序技术的核心思想是边合成边测序（Sequencing by Synthesis)，即通过捕捉新合成的末端的标记来确定 DNA 的序列，现有的技术平台主要包括 Roche/454 FLX、Illumina/Solexa Genome Analyzer 和 Applied Biosystems SOLID system。这三个技术平台各有优点，454 FLX 的测序片段比较长，高质量的读长（read）能达到 400bp；Solexa 测序性价比最高，不仅机器的售价比其他两种低，而且运行成本也低，在数据量相同的情况下，成本只有 454 测序的 1/10；SOLID 测序的准确度高，原始碱基数据的准确度大于 99.94%，而在 15X 覆盖率时的准确度可以达到 99.999%，是目前第二代测序技术中准确度最高的。二代测序作为新一代测序技术的出现，必将使得生物学讨论新领域不断被挖掘探究，而此项技术也将会被不断运用进展，在越来越多的领域中发挥巨大的力量。目前，二代测序主要有以下应用：1.基因组从头测序及重测序，从头测序主要应用于基因组序列未知的物种，重测序是指该物种基因组序列已被测序，有参考基因组序列的测序工作。在二代测序技术的推动下，大量生物的全基因组被顺利测序，大量物种的基因组计划完成。2.RNA 测序，灵敏度高，数字信号，无需事先知道基因组信息3.smallRNA 测序4.染色体免疫共沉淀测序，讨论体内 DNA 与蛋白质的相互作用5.DNA 甲基化，基因启动子甲基化检测在临床诊断、药物敏感性检测等方面具有很高的应用价值既然已经知道二代测序在技术方面的应用，接下来再看看二代测序在具体领域的应用。二代测序在临床的应用前景：“二代测序”技术带...
