实验一 植物叶绿素含量的测定（分光光度法）(张宪政，1992)一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度 A 与其中溶质浓度 C 和液层厚度 L 成正比，即 A＝αCL 式中：α 比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为 1cm 时，α 为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。假如溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素 a、b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度 A，并根据叶绿素 a、b 及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素 a、b 时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。高等植物中叶绿素有两种：叶绿素 a 和 b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。叶绿素 a 和叶绿素 b 的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。二、材料、仪器设备及试剂 试剂：1）95%乙醇（或 80%丙酮） 三、实验步骤 称取剪碎的新奇样品 0.2～0.3g，加乙醇 10ml，提取直至无绿色为止。把叶绿体色素提取液倒入光径 1cm 的比色杯内，以 95%乙醇为空白，在波长 663nm 和 645nm下测定吸光度。 四、实验结果按计算丙酮法（Arnon 法）【可以用于丙酮乙醇混合法和 80%丙酮提取法的计算】叶绿素 a 的含量（mg/g） =（12.71OD663 – 2.59OD645）V/1000*W叶绿素 b 的含量（mg/g） =(22.88OD645 – 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素 a、b 的总含量（mg/g） =(8.04OD663 +20.29OD645) V/1000*W按 Inskeep 公式叶绿素 a 的含量（mg/g） =（12.63OD663 – 2.52OD645）V/1000*W叶绿素 b 的含量（mg/g） =(20.47OD645 – 4.73OD663) V/1000*W叶绿素 a、b 的总含量（mg/g） =(7.90OD663 + 17.95OD645) V/1000*W注：1、叶绿素 a 和叶绿素 b 的比值反映植物对光能利用率 【1】 比如阳生植物叶绿素 a 和叶绿素 b 的比值较大 【2】阴生植物叶绿素 a 和叶绿素 b 的比值较小 2、丙酮-------熔点:-94℃ ；沸点:56.48℃；是一种无色透明液体...
