比浊法操作手册VIP专享

比浊法操作规程一、预备工作：〔一〕培育基的制备：1、III 号培育基的制备胨5 g葡萄糖1 g牛肉浸出粉1.5 g磷酸氢二钾3.68g磷酸二氢钾1.32 g氯化钠3.5 g酵母浸出粉3 g水1000ml除葡萄糖外，混合上述成分，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调整 pH 值使灭菌后为 7.0～7.2，在 115℃灭菌 30 分钟。2、养分琼脂培育基的制备依据养分琼脂培育基上标注的比例系数，进展养分琼脂培育基和纯化水配制。或者依据药典进展配制。胨10 g氯化钠5 g琼脂15~20 g肉浸液1000 ml除琼脂外，混合上述成分，调整 pH 值使比最终的 pH 值略高 0.2～0.4， 参加琼脂，加热溶化后滤过，调整 pH 值使灭菌后为 7.2～7.4，分装，在 115℃灭菌 30 分钟，趁热斜放使凝固成斜面。3、留意事项（1） 含有葡萄糖的培育基应在各成分加热溶解后再参加，其目的是防止葡萄糖加热被破坏。（2） 配制的培育基必需调整 pH 值，保证培育基灭菌后其 pH 值在规定范围之内；测定硫酸庆大霉素的培育基 pH 值灭菌后最好在 7.15～7.20。pH 值的测定使用酸度计或其它准确度较高的仪器，使用 20%的氢氧化钠溶液或浓盐酸进展调整；调整 pH 时应避开反复调整。（3） 配制的培育基应透亮、无沉淀。应先调整 pH 再分装后灭菌。（4） 配制好的培育基应储存在冷处，消灭浑浊后不能连续使用。〔二〕缓冲液的制备：1、pH7.0 磷酸盐缓冲液 〔BP〕磷酸二氢钾 13.6 g氢氧化钠 2.37 g灭菌水 2025 ml2、pH7.8 磷酸盐缓冲液磷酸氢二钾 5.59g磷酸二氢钾0.41 g水1000ml3、留意事项（1） 所用化学药品规格不低于二级试剂(AR)规格。（2） 配制后假设消灭沉淀或浑浊应用耐酸滤过漏斗滤过，使溶液澄清。（3） 缓冲液配制后应澄明无色、无菌、无浑浊沉淀，应避开被毛点、纤维污染。（4） 配制后应灭菌保存使用。〔三〕试验菌：菌悬液的制备：金黄色葡萄球菌悬液 取金黄色葡萄球菌的养分琼脂斜面培育物， 接种于养分琼脂斜面上，在 35～37℃培育 20～22 小时。临用时，用灭菌水或 0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。大肠杆菌悬液 取大肠杆菌的养分琼脂斜面培育物，接种于养分琼脂斜面上，在 35~37℃培育 20~22 小时。临用时，用灭菌水将菌苔洗下， 备用。白色念珠菌悬液 取白色念珠菌的改进马丁琼脂斜面的颖培育物， 接种于 10 mlⅨ 号培育基中，置 35~37℃培育 8 小时，再用Ⅸ号培育基稀释至适宜浓度，备用。〔四〕试验器具：1、比...