MiR-200aKEAP1NRF2抗氧化信号通路对糖尿病动脉内皮的作用及机制研究

MiR-200a/KEAP1/NRF2 抗氧化信号通路对糖尿病动脉内皮的作用及机制讨论糖尿病是一种严重威胁人类健康的慢性病,发病率逐年升高。糖尿病所致动脉病变是糖尿病足截肢的直接病因,致残、致死率高,严重影响居民健康,对社会经济造成巨大负担。然而糖尿病所致动脉病变机制未明,尚缺乏有效干预手段。糖尿病导致的动脉内皮损伤是糖尿病动脉病变发生的前期病理过程。因此探讨糖尿病动脉内皮损伤的发生机制、寻找有效的干预靶点对糖尿病动脉病变的防治意义重大。氧化应激是糖尿病致动脉内皮损伤的重要机制。核因子相关因子 2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,NRF2)是细胞抗氧化系统的核心调控因子,作为转录因子可进入细胞核启动多种抗氧化基因转录,提高细胞抗氧化能力,对抗糖尿病引起的细胞氧化应激损伤。因此,激活 NRF2 是减轻糖尿病动脉内皮损伤的有效策略。Kelch-like ECH-associated protein 1(KEAP1)蛋白是 NRF2 的关键负调控因子。在细胞质中,KEAP1 与 NRF2 结合,阻止 NRF2 进入细胞核发挥转录因子作用。此外,KEAP1 还诱导 NRF2 经蛋白酶体降解。由此可见,抑制 KEAP1 是激活NRF2 的有效手段。我们前期讨论显示,KEAP1 的特异性小分子抑制剂 dimethyl fumarate 可激活 NRF2,提高细胞抗氧化能力。除抑制 KEAP1 蛋白功能外,在 m RNA 水平调控Keap1 表达、降低 KEAP1 蛋白表达量亦可能是激活 NRF2 的有效手段。然而目前对 Keap1 m RNA 的表达调控机制尚不清楚。Micro RNA(miRNA)是一类具有转录后调节活性、高度保守、长度为 18~25 个碱基的内源性非编码单链 RNA。MiRNA 与靶 m RNA 的 3’untranslated region(3’UTR)互补结合,直接降解靶 m RNA 或抑制靶蛋白的翻译过程。我们的前期讨论发现 miR-200a 可在糖尿病肾脏中降解 Keap1 m RNA、激活 NRF2 通路。然而 miR-200a 对糖尿病动脉内皮损伤的作用及机制尚不明确。目的:1.观察 miR-200a/KEAP1/NRF2 信号通路对糖尿病动脉内皮损伤的作用。2.分别探讨 KEAP1 和 NRF2 在介导 miR-200a/KEAP1/NRF2 抗氧化信号通路效应的作用。方法:1.采纳高糖分别处理原代培育的野生型小鼠动脉内皮细胞 1 h、6 h、12 h、24 h、48 h,观察对 miR-200a/KEAP1/NRF2 信号通路、氧化应激、炎症因子表达的影响。2.为观察 miR-200a 对糖尿病动脉内皮细胞 Keap1、NRF2 通路表达,以及氧化应激、炎症因子表达的影响,采纳高糖及 miR-200...