转基因果蝇的杂交重组和鉴定生 06 郑华 2025030065同组成员：刘紫薇 潘周娴 贺佳琳 王宇宁实验日期：2025 年 4 月 4 日至 5 月 27 日1. 实验目的：把插入在同一个染色体上的不同目的基因（分别处于两个品系果蝇中）通过重组交换整合到同一品系果蝇的同一染色体上，并得到可以稳定保存的品系（balanced 或 homozygous）。2. 实验原理转基因果蝇（transgenic fly）是将带有目的基因的质粒通过显微注射转入白眼果蝇卵中，这些质粒上一般带有 P 转座子序列（P elements are transposable pieces of DNA that randomly insert themselves into genomic DNA），使得目的基因可以插入到果蝇染色体中。一般使用白眼果蝇的卵进行显微注射，质粒上带有的 mini-white 基因（红眼）可以作为转基因成功的标记（marker），带有目的基因的果蝇将成为红眼果蝇。mini-white的表达量决定了果蝇眼睛红色的深浅，这与目的基因插入位置和 copy 数目有关，入位置附近的染色体结构和启动子决定 mini-white 表达量，纯和果蝇比杂合果蝇表达量也高，有多个插入位点的比单个插入位点的表达量高，一般情况下只有一个插入位点。有基因 A 的转基因果蝇系 tA 和基因 B 的转基因果蝇系 tB，A 和 B 分别插在 tA 和 tB 的三号染色体上（t 表示 transgenic）。带平衡子的果蝇相应染色体不能发生重组，使得杂交过程和鉴定方法更为简单。另外，还需要应用到一个 UAS-Gal4 系统的神经细胞的 driver，为 GMR-Gal4，进行重组成功的鉴定。GAL4/UAS 系统是目前果蝇中十分常用的实验系统（见下图说明）。该系统利用组织特异性的启动子或增强子，将 GAL4 基因与启动子或增强子相连接,建立 GAL4 转基因系，通过这种启动子以细胞和组织特异性的方式来控制 GAL4 的表达。另外，将 UAS 与靶基因融合，建立带有 UAS-靶基因的转基因系。在杂交后代中,特异性表达的 GAL4 能以同样的方式调节 UAS-靶基因的表达。3. 实验材料转基因果蝇 A、B/Ser(翅膀缺刻)、+/Sb balancer（白眼，平衡子 Sb，短刚毛）的果蝇以及 GMR-Gal4 果蝇。其中，tA 果蝇系为纯合体，转入 Tau 基因，该转基因与 GMR-Gal4 果蝇系进行杂交，其在 GMR-Gal4 的驱动下，产生子代的成体果蝇眼睛缺陷，表现为发育不全。 tB 果蝇系为纯合致死，带有一个 Serrate（翅膀缺刻）的balancer，其自身带有 GFP 基因，能自发绿色荧光，在荧光显微镜下...
