第四章 生物化学与分子生物学技术实践知识系统构建必背要语1.分离与测定生物成分中蛋白质的技术包括离心沉降法、薄膜透析法、凝胶色谱法和电泳法等。2.离心沉降法是通过控制离心速度，使分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层，从而达到分离出不同种类蛋白质的目的。3.薄膜透析法是利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性，使蛋白质与其他小分子化合物分离开。4.凝胶色谱法是根据蛋白质分子量的大小差异对其进行有效分离的方法。5.芳香油挥发性强、易溶于有机溶剂，因此可以采用蒸馏法、萃取法、压榨法等进行提取。水蒸气蒸馏法是植物芳香油提取的常用方法。对于不适于蒸馏的原料可以采用萃取法。6.PCR 扩增过程中要进行无菌操作，避免污染，且向离心管中加入模板 DNA、引物和 4 种脱氧核苷酸以及 TaqDNA 聚合酶。7.变性是在 94 ℃高温下使模板双链 DNA 解旋。8.退火是将反应体系温度降至 55 ℃，使引物与模板 DNA 链配对。9.延伸是将反应体系温度回升至 72 ℃左右，在 TaqDNA 聚合酶作用下，使引物链延伸，形成互补的 DNA 双链。10.DNA 分子的测定：DNA 分子＋二苯胺试剂――→蓝色物质。规律方法整合整合一 蛋白质的分离与纯化1.薄膜透析法(1)破碎细胞方法：研磨与超声波结合的方法。(2)血红蛋白的释放：使红细胞破裂释放血红蛋白。(3)透析目的：除去样品中的小分子杂质。原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内。2.离心沉降法离心沉降法也是纯化蛋白质的一种方法，它通过控制离心速率，使得分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层，从而达到分离出不同种类蛋白质的目的。3.醋酸纤维薄膜电泳法(1)原理：不同的物质在同一电场中的泳动速度不同。(2)影响因素：泳动速度主要取决于带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带净电荷的多少。一般来说，带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷越多，则在电场中的泳动速度越快；反之，则越慢。此外，电场强度、溶液的 pH 等因素对泳动速度也有影响。(3)优点：简单、快速、分离清晰、灵敏度高、样品用量少、没有吸附现象、电泳后区带界限清晰等优点。4.凝胶色谱法根据蛋白质分子量的大小差异对其进行有效分离的方法。(1)相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢。(2)相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白...
